一、材料和試劑
1、玻片:須用免疫組化專用玻片,或用2%多聚賴氨酸包被處理玻片。
2、5-10%正常山羊血清封閉液,用PBS配。
3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。
4、0.01M pH7.4 PBS
5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20)
6、AEC底物
(1)底物緩沖液(20X) PH 4.6
醋酸(分子量60.6) 30.6ml
Triton X-100
醋酸鈉 3H2O(分子量136.1)66.68克
加蒸餾水到960ml,調pH到4.6,最后加蒸餾水到總體積1000ml。
(2)AEC(20X)
AEC 15mg/ml,溶在DMF(二甲基甲酰胺,分子式HCOH(CH3)2 分子量73.10中)
(3)0.6% H2O2(20X)
臨用時,(1)(2)(3)各50ul,在1ml雙蒸餾水中混勻30分鐘內有效。
7、DAB(即DAB-4HCL)
(1)1.5克DAB在100ml水溶液中(20X)
(2)1M Tris(20X),用HCl調PH到7.4
(1)(2)(3)各滴加入1ml二蒸水中,新鮮配,避光,30分鐘內有效。溶解后(可加熱到50℃),加水合氯醛50克(水合氯醛Chloral Hyclrate,分子量165.4),枸櫞酸1克,充分溶解,于棕色瓶中,室溫或400C保存。
8、蘇木素復染液
蘇木素 1克
碘酸鈉 0.2克
鉀礬 50克
水 1000ml
9、含10%及2%小牛血清的DMEM培養液。
10、3% H2O2:30% H2O21份,加9份雙蒸水,臨用時配。
11、細胞抗原玻片及96孔細胞抗原板
12、封片液:1克明膠,溶于30ml 35℃水中,加入35ml甘油(或用甘油封片)和650mg石碳酸(先溶于0.6ml水中)。
二、細胞內源過氧化物酶阻斷(使用HRP標記二抗或SP法時必須阻斷)
1、從冰箱取出細胞片或細胞板,置室溫或37℃ 10-15分鐘,使恢復溫度。