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  • 發布時間:2020-09-14 15:04 原文鏈接: 酶免疫細胞化學染色操作指南1

    一、材料和試劑

    1、玻片:須用免疫組化專用玻片,或用2%多聚賴氨酸包被處理玻片。

    2、5-10%正常山羊血清封閉液,用PBS配。

    3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。

    4、0.01M pH7.4 PBS

    5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20)

    6、AEC底物

    (1)底物緩沖液(20X) PH 4.6

    醋酸(分子量60.6) 30.6ml

    Triton X-100

    醋酸鈉 3H2O(分子量136.1)66.68克

    加蒸餾水到960ml,調pH到4.6,最后加蒸餾水到總體積1000ml。

    (2)AEC(20X)

    AEC 15mg/ml,溶在DMF(二甲基甲酰胺,分子式HCOH(CH3)2 分子量73.10中)

    (3)0.6% H2O2(20X)

    臨用時,(1)(2)(3)各50ul,在1ml雙蒸餾水中混勻30分鐘內有效。

    7、DAB(即DAB-4HCL)

    (1)1.5克DAB在100ml水溶液中(20X)

    (2)1M Tris(20X),用HCl調PH到7.4

    (1)(2)(3)各滴加入1ml二蒸水中,新鮮配,避光,30分鐘內有效。溶解后(可加熱到50℃),加水合氯醛50克(水合氯醛Chloral Hyclrate,分子量165.4),枸櫞酸1克,充分溶解,于棕色瓶中,室溫或400C保存。

    8、蘇木素復染液

    蘇木素 1克

    碘酸鈉 0.2克

    鉀礬 50克

    水 1000ml

    9、含10%及2%小牛血清的DMEM培養液。

    10、3% H2O2:30% H2O21份,加9份雙蒸水,臨用時配。

    11、細胞抗原玻片及96孔細胞抗原板

    12、封片液:1克明膠,溶于30ml 35℃水中,加入35ml甘油(或用甘油封片)和650mg石碳酸(先溶于0.6ml水中)。

    二、細胞內源過氧化物酶阻斷(使用HRP標記二抗或SP法時必須阻斷)

    1、從冰箱取出細胞片或細胞板,置室溫或37℃ 10-15分鐘,使恢復溫度。

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