酶抑制作用（enzyme inhibition）是指酶的功能基團受到某種物質的影響，而導致酶活力降低或喪失的作用。該物質即稱為酶抑制劑。酶抑制劑對酶有選擇性，是研究酶作用機理的重要工具。很多藥物，毒物和用于化學戰爭的毒劑都是酶抑制劑。
此外，還有一些具有一定功能的存在于動植物體內的生物大分子也是酶抑制劑。
酶受抑制時其蛋白部分并未變性。由于酶蛋白變性造成的酶失活作用，以及除去活化劑（如酶活力所必需的金屬離子）而造成酶活力的降低或喪失，不屬于酶抑制作用的范疇。
