酶標儀利用”無創”技術檢測活細胞熒光蛋白（三）

在本次實驗中，ZsGreen和DsRed細胞系在底讀模式都有著相似的檢測限，而且兩者都比AcGFP細胞系的檢測下限低3到4倍。本次實驗一共重復了三次，但是DsRed實驗結果并不是每次都能表現的足夠好。在一次實驗中，它的檢測下限近似于AcGFP，但是在另一次實驗中，它的檢測下限又會很高。我們將這些區別歸結于不同細胞系的通道數目不同。(伴隨著一個成功的通道，細胞就會變得越暗)DsRed細胞系在實驗開始階段比其它細胞系長得快，所以在第一次實驗中，它比其它細胞系多2-4倍的通道，結果就顯然不夠理想。

對于AcGFP和ZsGreen細胞系，當采用頂讀時，檢測下限升高將近三倍。另一方面，對于DsRed，當采用頂讀時，檢測下限會升高將近10-20倍。我們認為造成這種靈敏度下降的原因在于DMEM培養基有紅色熒光信號，會對結果有內部干擾。事實也證明，將培養基換成無色的HBSS，相應的DsRed的頂讀結果也會變好。列表3展示了將有色培養基換成無色培養基的結果。底讀并沒有太多改變(盡管AcGFP的檢測下限看起來改善了)，證明這種操作方法并沒有導致細胞的損失。然而頂讀結果卻讓靈敏度改善了將近三倍。這些結果也從某一方面支持了一種理論，那就是有色培養基會一定程度上影響頂讀的靈敏度。

細胞混合結果

在本次實驗中，我們在一個96孔板里混合了多種細胞，保證每個孔大約50,000個細胞。因此，如果是1:1混合，那么每種細胞會有25,000個。如果是1:1:1混合，那么每種細胞將有1 6 , 7 0 0 個。實驗板分別用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的優化結果)和550/588nm(DsRed設置)的激發和發射來檢測。觀察到的RFU值與預測值接近。結果總結如下。結果顯示，AsGF P和ZsGreen可以和DsRed一起檢測，反之亦然。(見圖表4)

結論

Molecular Devices公司的熒光讀板儀可以檢測完整貼壁細胞中的熒光蛋白。波長掃描可調的功能可以優化每一種獨特熒光染料的波長結果。底讀模式提供最佳檢測靈敏度，頂讀模式也可以提供可利用的數據，尤其是對含有ZsGreen和DsRed的細胞系。頂讀模式檢測DsRed細胞系時，可以通過替換無色培養基來達到優化實驗結果的目的。