酶標儀的選擇、自檢和校準

  一、酶標儀的選擇

    面對類型如此眾多的酶標儀，實驗室在選擇時往往有難以適從的感覺。一般來說，用于酶免疫測定比色的酶標儀可分為普通酶標儀，多功能全自動酶標儀和全自動酶免疫分析系統等，普通酶標儀的功能基本上相當于一個微孑L板比色計，而多功能全自動酶標儀除了有微孔板比色功能外，還有酶標動力學，紫外乃至凝集等多種檢測功能；全自動酶免疫分析系統則有試劑“開放”和“限定”之分，所謂試劑“開放”是指不同品牌的ELISA試劑均可用于該儀器，而試劑“限定”則必須使用儀器的酶免測定試劑。實驗室在選擇酶標儀時，一般應遵循這樣幾條原則：

    1．根據工作需要去選擇。切忌刻意去求功能多，因為一則如果儀器功能過多，易出故障，二則有些功能如酶標動力學或凝集等，可能根本就用不上；如果擬購置的酶標儀主要是用于定性測定，則不必要求的定量所需的軟件系統。至于全自動酶免疫分析系統則對工作量比較大的血站或大型醫院較為適用，對于日常工作量不太大的實驗室，就無必要。

    2．根據酶標儀的性能去選擇。反應酶標儀性能的指標主要有測定波長范圍，濾光片配置，檢測速度，吸光度范圍，線性范圍，分辨率，準確度，精密度等。

    3．根據自己實驗室的財力去選擇。酶標儀品種類型多，由于性能不一，價格自然也就相差較大，實驗室可根據自己的財力去選擇性能／價格比較為合適的酶標儀。

    4．根據售后服務去選擇。實驗室儀器買了以后，就跟我們家里使用的家用電器一樣，在使用過程中及使用一段時間之后，很可能就會有保修或維修方面的問題，因此一定要選擇售后服務好的公司的酶標儀。

    5．根據實驗室人員的外語水平去選擇。進口酶標儀現有不少已使用中文人機對話，對于英語上有困難的實驗室，應盡可能選用此類酶標儀。

    確定了選擇原則以后，就是怎樣去選擇了。選擇的步驟首先是要獲取有關酶標儀的信息資料，一般有這樣幾條途徑：

    ①向已購不同酶標儀的多家實驗室同行咨詢訪問，獲取zui直接的使用效果的信息；

    ②酶標儀銷售商的信息廣告及介紹；

    ③機構的儀器評估報告。

    獲取了盡可能多的酶標儀信息資料后，就是對不同類型的酶標儀的性能指標進行比較，選擇較為適合本實驗室的一種或二，三種再向銷售商作進一步的詳細咨詢了解，以決定選擇哪一種進行自檢。

    二、酶標儀的自檢和校準從上述所獲的酶標儀性能的有關信息資料，基本上可以說是間接的，有了目標以后，如果還想獲得對某一酶標儀的感性認識，可以對其進行自檢，主要有下述幾個方面。

    （一）外觀

    酶標儀上應有儀器名稱，型號，編號，生產廠家，出廠日期和電源電壓；各調節旋鈕，按鍵和開關均能正常工作，外表面無明顯機械損傷；顯示文字應清楚完整。

    （二）酶標儀的穩定性（漂移）

    選用492nm波長，在吸光度o．0A處，測定標稱值為1．0A的光譜中性濾光片（測定操作按儀器說明進行），記錄儀器示值或均值，10min后再次記錄儀器示值或均值，前后兩次測定值之差不應超過±0．00。

    （三）吸光度測定的準確度

    選用405，492和620 nm波長，以空氣為參比，分別測定標稱值為0．5和1．0A的光譜中性玻璃濾光片，用測試板代替酶標板，按儀器說明連續測定3次，按下式計算準確度：AA＝1／3（A、+A。+A3）—A：（A：為標準值）。

    （四）吸光度測定的重復性

    波長選擇同（3），在酶標板*排加注空白溶液，第二排加入濃度為200rig／ml的重鉻酸鉀溶液，重復測定5次。記錄每次測定的第二排吸光度值，取第二排任一孔吸光度值與各次對應孔吸光度值。按下式計算重復性：

    （五）酶標儀的線性

選用540nm波長，將標稱值o．5，1．0A中性濾光片分別放入測試板樣本位置中，以空氣為參比，各重復測定3次；然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于測試板的同一孔位中，重復測定3次。線性誤差：

    式中A1為*片中性濾光片吸光度均值，A：為第二片中性濾光片吸光度均值，A1，2為兩片中性濾光片疊加后的吸光度均值。

    （六）測定速度的檢定  ．

    選用492nm波長，放人96孔酶標板進行測定，用秒表計測儀器打印出全部數據的時間。

    酶標儀除了在選購時，應盡可能自檢外，在使用中也應定期檢定，以保證酶標儀測定的有效性。

    附：200ttg／ml重鉻酸鉀溶液的配制

    將重鉻酸鉀固體試劑放人稱量瓶中（去蓋）置于烘箱中，在105±5℃下烘2h后，置于干燥器內冷卻30min，在分析天平上準確稱取o．2829g，置于100ml燒杯中，用o．05mol／L稀硫酸溶解后，移入500ml容量瓶中，以少量o．05mol／L稀硫酸洗燒杯3次，洗液并入容量瓶中，用0．05mol／L稀硫酸稀釋至刻度線，搖勻。