該法多用于檢測多價大分子抗原，但不能用于檢測半抗原等小分子物質。
【試劑及配制】
（1） 包被液（pH 9.6 碳酸鹽緩沖液）
Na2CO3 0.16g
NaHCO3 0.29g
蒸餾水加至 100ml
(2)稀釋液(pH 7.4 -Tween 20)
KH2PO4 0.2g
Na2HPO4·12H20 2.9g
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Tween 20 0.5ml
蒸餾水加至 1000ml
(1) 洗滌液(0.01mol/L pH7.4 Tris-HCl- Tween 20)
Tri 2.42g
0.1mol/L HCl 13ml
Tween 20 0.5ml
蒸餾水加至 1000ml
(2) 底物溶液 見附錄
(3) 終止液(2mol/L H2SO4)：濃H2SO422.4ml，加蒸餾水177.6ml。
(4) 封閉液（1%A pH 9.6 碳酸鹽緩沖液）
【操作方法】
(1) 用包被液將以知抗體稀釋成一定濃度，加于酶標板中，100ml/孔；
(2) 置濕盒內，4℃過夜；
(3) 棄上清，控干，加封閉液，200ml/孔，置濕盒內，37℃2h；
(4) 加洗滌液100ml/孔，靜止3min，棄上清，控干；
(5) 重復步驟（4）2次，去除游離的抗原；
(6) 加入標準抗原和待檢樣本（視樣本不同，按一定稀釋度稀釋），100ml/孔，置濕盒內，37℃1h；
(7) 棄上清，控干，重復步驟（4）3次；
(8) 加入一定濃度的mAb，100ml/孔，置濕盒內，37℃1h；若使用的抗體是酶標抗體，則步驟（9、10）省去；
(9) 棄上清，控干，重復步驟（4）3次，去除游離的抗體；
(1) 加入工作濃度的酶標二抗（羊抗鼠），100ml/孔，置濕盒內，37℃1h；
(2) 棄上清，控干，重復步驟（4）3次；去除游離的酶標抗體；
(12) 加入底物溶液，100ml/孔，避光室溫反應15-20min；
(13) 加終止液，50ml/孔，用酶聯檢測儀測定OD值。