酶活力測定的方法很多，如化學測定法、光學測定法、氣體測定法等。酶活力測定均包括兩個階段：首先是在一定條件下，酶與底物反應一段時間，然后再測定反應體系中底物或產物的變化量。一般經過以下幾個步驟：
（1）根據酶催化的專一性，選擇適宜的底物，并配制成一定濃度的底物溶液。所用的底物必須均勻一致，達到酶催化反應所要求的純度。
（2）根據酶的動力學性質，確定酶催化反應的pH值、溫度、底物濃度、激活劑濃度等反應條件，底物濃度應該大于5Km（Km見本章7.3.1.1）
（3）在一定條件下，將一定量的酶液和底物溶液混合均勻，適時記錄反應開始的時間。
（4）反應到一定的時間，取出適量的反應液，運用各種檢測技術，測定產物的生成量或底物的減少量。