實驗原理
酶的專一性是指一種酶只能對一種底物或一類底物(此類底物在結構上通常具有相同的化學鍵)起催化作用,對其他底物無催化反應。如淀粉酶只能催化淀粉水解,對蔗糖的水解并無催化作用。淀粉水解產物為葡萄糖,蔗糖水解產物為果糖及葡萄糖,這兩種己糖的半縮醛基可與
Benedict試劑反應,生成氧化亞銅的磚紅色沉淀。
本實驗以唾液淀粉酶(內含淀粉酶及少量麥芽糖酶)和蔗糖酶對淀粉及蔗糖的催化作用,觀察酶的專一性。
試劑和器材
一、試劑
2%蔗糖;1%淀粉溶液(含0.3%氯化鈉)。
本乃狄(Benedict)試劑:溶解85g檸檬酸鈉和50gNa2CO3?2H2O于400mL蒸餾水中;另溶 8.5g CuSO4?5H2O于50mL熱水中。將硫酸銅溶液緩緩傾入檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液中,邊加邊攪勻,如有沉淀可過濾除去,此試劑可長期保存。
二、材料
(1) 唾液淀粉酶溶液:先用蒸餾水漱口,再含10mL左右蒸餾水,輕輕漱動,約2分鐘后吐出收集在燒杯中,即得清澈的唾液淀粉酶原液,根據酶活高低稀釋 50-100倍,即為唾液淀粉酶溶液。
(2) 蔗糖酶溶液:取1g干酵母放入研缽中,加入少量石英砂和水研磨,加50mL蒸餾水,靜置片刻,過濾即得。
三、器材
試管1.5×15cm(×10),試管架;燒杯100mL(×1),200mL(×1);量筒 100mL(×1),10mL(×1);玻璃漏斗;竹試管夾;水浴鍋;。
操作方法
一、檢查試劑
取3支試管,按下表操作:
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操作項目 |
0 |
1 |
2 |
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1%淀粉溶液(mL) |
3 |
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2%蔗糖溶液(mL) |
3 |
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蒸餾水 (mL) |
3 |
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Benedict 試劑(mL) |
2 |
2 |
2 |
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沸 水浴煮沸2-3min |
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記錄觀察結果 |
二、淀粉酶的專一性
取3 支試管,按下表操作:
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操作項目 |
1 |
2 |
3 |
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唾液淀粉酶溶液(mL) |
1 |
1 |
1 |
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1%淀粉溶液(mL) |
3 |
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2%蔗糖溶液(mL) |
3 |
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蒸餾水 (mL) |
3 |
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搖勻置37度水浴保溫15min |
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Benedict 試劑(mL) |
2 |
2 |
2 |
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沸水浴煮沸2-3min |
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記錄觀察結果 |
三、蔗糖酶的專一性
取3 支試管,按下表操作:
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操作項目 |
1 |
2 |
3 |
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蔗糖酶溶液 (mL) |
1 |
1 |
1 |
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1%淀粉溶液(mL) |
3 |
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2%蔗糖溶液(mL) |
3 |
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蒸餾水 (mL) |
3 |
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搖勻置37度水浴保溫15min |
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Benedict 試劑(mL) |
2 |
2 |
2 |
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沸水浴煮沸2-3min |
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記錄觀察結果 |