酶提取液中常含有雜蛋白、多糖、脂類及核酸等雜質,可用下述方法去除:
調PH和加熱法:利用蛋白質對酸、堿和熱變性方面性質的差異,可去除非活性雜蛋白。如制備脂肪酶時,在pH 3-4時以400℃溫度加熱150 min,淀粉酶活力可喪失90%而被除去,而脂肪酶活力仍保持80%以上。
蛋白質表面變性法:蛋白質表面變性后其性質有所不同,借以去除雜蛋白。如制備過氧化氫酶時,加入氯仿和乙醇進行振蕩可以將雜蛋白變性而去除。
蛋白質沉淀劑法:利用醋酸鋁、利凡諾、單寧酸、離子型表面活性劑等蛋白質沉淀劑可以去除雜蛋白及粘多糖類雜質。使用時要注意這類試劑常可引起酶變性失活,因此應迅速除去。
選擇性變性法:各種蛋白質對變性劑的穩定性不同,可以用選擇性變性劑去除雜蛋白。如細胞色素丙對三氯醋酸較穩定,所以在制備時可用2.5%三氯醋酸使其它雜蛋白變性使沉淀除去。
加保護劑熱變性法:酶與底物或競爭性抑制劑結合后,其穩定性常顯著增加。所以常用它們為保護劑,再用一些劇烈手段破壞雜蛋白,如用D-甲基苯甲酸作為D-氨基酸氧化酶的保護劑,經加熱除去雜蛋白,使該酶得到很好的提純。
核酸沉淀劑法:酶液中的核酸類雜質,可以用氯化錳、魚精蛋白硫酸鹽等沉淀劑使其沉淀而除去。必要時,也可用核糖核酸酶將核酸降解后除去。
以色列魏茨曼科學研究院科學家在新一期《自然》雜志發表文章稱:他們利用基于酶工作原理的計算機新算法設計出高效人工合成酶。這種新型酶不僅能催化天然蛋白質無法完成的化學反應,其效率更達到人工智能(AI)設計......
近日,湖北大學生命科學學院、省部共建生物催化與酶工程國家重點實驗室“化酶智造”團隊取得關鍵技術突破。該團隊創新方法,通過反向設計化學合成路線和建立突變體酶庫,實現甾體C7位的選擇性羥基化,大幅簡化合成......
羅漢果苷是一類來自藥用植物羅漢果(Siraitiagrosvenorii)的三萜皂苷類次生代謝產物,具有高甜度低熱量等特點,在食品添加劑領域具有廣闊的市場應用前景,其中羅漢果苷V(M5)和賽門苷I(S......
粗提的β-葡萄糖苷酶可采用硫酸銨沉淀或用乙醇、丙酮等有機溶劑沉淀等方法初步分離。β-葡萄糖苷酶的進一步純化,往往是根據具體情況,采用多種方法逐步分離。目前分離β-葡萄糖苷酶的方法較多,其中離子交換柱層......
酶是一種活性蛋白質。因此,一切對蛋白質活性有影響的因素都影響酶的活性。酶與底物作用的活性,受溫度、pH值、酶液濃度、底物濃度、酶的激活劑或抑制劑等許多因素的影響。(一)溫度大曲和麩曲的酶活性,在低溫干......
美國杜克大學領導的一個研究團隊開發出一種方法,可擴大CRISPR技術的覆蓋范圍。最初的CRISPR系統只能靶向人類基因組的12.5%,而新方法使CRISPR技術能夠準確靶向幾乎所有人類基因,使人們通過......
科學家們發現了一種名為PUCH的酶,它對于阻止寄生DNA序列在我們基因組中的傳播至關重要。這一發現可以讓我們深入了解我們的身體如何識別和對抗內部威脅(如基因組寄生蟲)和外部威脅(如病毒和細菌)。德國美......
在一項新的研究中,來自英國諾丁漢特倫特大學的研究人員確定了一種特定的酶如何在使前列腺癌變得更具侵襲性和更難治療方面發揮關鍵作用。他們發現這種在身體的許多細胞中含量豐富的稱為轉谷氨酰胺酶2(transg......
代謝工程和合成生物學工具有潛力馴化微生物細胞工廠,這些工廠能夠有效生產大量化學品和材料,包括大宗和特種化學品、生物燃料、聚合物和藥物。所需產物的微生物生產可以通過在微生物底盤細胞中異源表達特定酶或整個......
德國研究人員近日發現一種具有同化特性的原型亞硫酸鹽還原酶,通過這種特殊的酶,產甲烷微生物可將對其有害的亞硫酸鹽轉化成生長所需的硫化物。該研究提供了對進化的新見解,相關成果發表在《自然·化學生物學》雜志......