酶聯免疫吸附試驗在輸血標本檢測中影響因素的探討

　ELISA法具有靈敏高、特異性強、重復性好的特點。被廣泛用于臨床上多種疾病的檢查、診斷，但在標本的采集、試劑的質量、操作的程序、結果的判斷等方面受人為的因素影響較多，而臨床對血液檢測的準確度和精確度要求較高，不允許有誤差，否則將導致極其嚴重的后果。為了確保安全用血，筆者就實際工作中常見的影響因素進行小結。

 　　1 標本的采集    
　　1.1 防止污染 血液標本的采集做到一人一針一管，吸樣時，必需使用一次性移液嘴。以HBsAg為例，若有1/萬濃度陽性血清的污染則能引起被污染的標本測定結果為陽性。   
　　1.2 及時測定 血樣采集后應及時檢測，久置后細胞代謝，細菌繁殖，增加了許多異性物質，易產生溶血。如不能及時測定，應將標本血清分離后放置在4℃冰箱中保存，但不超過3天。   
　　1.3 避免稀釋 血液的檢測包括初檢和復檢，復檢的標本來源于連接采血袋的皮管中的全血，在留取時，不能采用被保養液（抗凝劑）稀釋后的抗凝血進行測定，否則被檢測物的濃度降低，結果出現假陰性。

　　2 試劑的影響    

　　2.1 目前衛生部國家藥品生物制品研究所對國內應用甚廣的數種ELISA試劑，按照國家標準實行“批批檢”，凡合格者，貼上國家防偽標簽才能在市場上推銷使用。如HBsAg、抗-HCV、抗-HIV抗體等。   
　　2.2 不同批號、不同廠家的試劑，由于酶標記物中酶的濃度不盡相同，與固相載體上的相應抗原或抗體發生特異性反應的程度不同，故不能混合使用。對于超過有效期的試劑則嚴禁使用。    
　　2.3 試劑的運輸、貯存要在低溫（2～8℃）條件下進行。因酶類物質是一種特殊的蛋白質，久置、反復凍融或受熱后，酶易失去活性，試劑條如果一次用不完時，應進行密封保存防止受潮。   
         3操作的要求    
　　3.1 不同廠家生產的試劑其樣品加入量、水浴時間、陰陽對照等各不相同，應嚴格按照說明書中要求進行，吸樣要準確，試劑加入的順序不能顛倒，每一步加樣后均需在振蕩器上混勻充分。   
　　3.2 洗滌的效果直接影響實驗結果的準確性。每次洗板之前要配制新鮮的洗滌液，室溫較低時，洗滌液要在水浴箱中先預溫30min。用洗板機進行洗板時，每次都要吸凈孔內洗液且不能留有氣泡，傾去洗液時，必需用吸水紙吸盡洗液。   
　　3.3 陰、陽性對照對測定結果的準確性至關重要，每次試驗都要做3份以上陰性對照和2份以上陽性對照，要嚴格注意試劑盒說明書中規定的陰、陽性對照A值的界限。

　　4 結果判斷   
　　4.1 認真做好室內和室間質控。根據陽性對照計算值和陰性對照計算值來判斷測試結果是否有效，每次測試結果必需在酶標儀上打印出來且記錄完整，便于前后對照和查找。   
　　4.2 臨界值結果OD值上、下10%～15%的區域為灰區，報告時要甚重，因為ELISA法的影響因素較多，±15%內的差異視為正常。遇此情況，可重復測試或進一步做確證試驗，以確保結果正確，減少臨床用血中的糾紛。 
　　4.3 結果表示方法   
　　4.3.1 陽性判定值法（Cut-Value） 如某試劑盒的陽性判定值=NCx+0.05其中NCx為陰性對照的平均A值，0.05為常數。標本A值≥陽性判定值其結果為陽性。    
　　4.3.2 S/N值 待測標本A值/陰性對照A值≥2.1倍為陽性，當試劑盒陰性對照物用某些代用品時，其陰性對照A值<0.05時，按0.05計算，以防假陽性出現。    
　　4.3.3 S/CO值S/CO值≥1為陽性 S為標本A值，CO即Cut-off值，為便于統一計算和比較，S/CO值的判斷將成為國內外統一判斷結果的趨勢。例如:某標本檢測HBsAg其A值為0.2，N值為0.06，其CO值0.06×2.1=0.126，因S=0.2則S/CO=0.2/0.126=1.6>1故該標本應判為陽性。

　　5 小結

 　　血液檢測質量是臨床用血安全的保證，當病人急需要救助時，輸入健康的血液可以救人一命，如果輸入不健康或“亞健康”的血液，就將后患無窮。血液檢測指標中有三項是ELISA法，可見酶聯免疫吸附試驗的影響因素在輸血檢測中是何等重要。

　　作者單位:224700江蘇省建湖縣人民醫院 

       中華現代中西醫雜志 2004年9月第2卷第9期