TCA 沉淀的另一有用的替代方法是使用酸化的丙酮-甲醇混合液。酸化有助于通過將去垢劑溶于有機相而蛋白質產生沉淀以去除樣品中的 SDS。丙酮和甲醇都能以任何比例溶解于水中,因此不會發生相分離。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南,作者:朱厚礎。
| 試劑、試劑盒 | 鹽酸丙酮甲醇 |
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| 實驗步驟 | 材料
鹽酸(高純;如 J,T-Baker 的 Ultrex 級)
丙酮(高純;如 Aldrich 的金標級)
甲醇(高純;如 Aldrich 或 Burdick&Jackson 的最同市售級)
操作程序
本操作程序是根據 Current Protocolsin Molecular Biology —書改進而成的
1) 配制酸化丙酮:
丙酮 120 ml
HCl 10ul
混合,制成1mmol/L 溶液。
2) 配制沉淀劑:將等體積的酸化丙酮和甲醇混合在一起。置-20℃ 冰箱冷凍。
3) 真空離心,將蛋白質溶液濃縮至少于 0.1 ml。
4) 加入過 5 倍量(按體積)的沉淀劑于蛋白質水溶液。徹底混勻,在-20℃ 冰箱中孵育過夜。
5)4°C 下,用微型離心機的以最高轉速離心 30 min。
6) 用精細的巴斯德吸管小心移去上清。沉淀物置通風櫥中,用氮氣吹 1h,至干。 展開 |
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