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  • 發布時間:2020-08-17 20:24 原文鏈接: 釀酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效轉化法實驗

    實驗材料 DNA


    試劑、試劑盒 TE 緩沖液雙蒸水


    儀器、耗材 磁力攪拌器玻璃燒杯


    實驗步驟


    一、單鏈載體 DNA 的制備


    1. 在 100 ml 滅菌 TE 緩沖液中溶解 200 mg 高分子量 DNA,置于磁力攪拌器上劇烈攪拌 2~3 個小時以混勻。


    2. 將載體 DNA 溶液分裝成 9 個 10 ml 和 10 個 1 ml 的等份,儲存于 -20℃。


    3. 在使用前,將 1 ml 的載體 DNA 煮沸 10 分鐘,并于冰水浴中迅速冷卻。


    二、醋酸鋰的制備


    1. 在 90 ml 雙蒸水中溶解 10.2 g LiAc。


    2. 調節終體積到 100 ml,過濾除菌。


    三、PEG 的制備


    1. 將 50 g 分子量為 3350 的 PEG 放入 150 ml 的玻璃燒杯中,加入 35 ml 雙蒸去離子水。


    2. 用磁力攪拌器攪拌至溶解,大約需要 30 分鐘。


    3. 將液體轉移到 100 ml 的量筒中。


    4. 用少量雙蒸水洗一下燒杯并加到盛 PEG 的量筒中,使體積恰恰達到 100 ml,通過顛倒充分混勻。


    5. 用 0.45 μm 的濾膜過濾除菌,儲存于帶密封蓋的瓶子中。


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