重組蛋白[RecombinantProtein]純化的基本策略

一、融合表達蛋白的純化：
融合表達蛋白可以在原目標分子之外帶有GST肽段或（His）6肽段，從而使得可以分別用Glutathione Sepharose凝膠或Chelating Sepharose凝膠進行親和色譜分子，一步可以達到~90%的純度，經過特異蛋白酶切后，再進行離子交換及高分辨凝膠過濾一般便可以達到所需的純度（95~99%）。
二、包含體表達蛋白的純化：
在E.coli系統表達重組蛋白，表達量高時，常形成包含體，包含體易于與細胞其他組分分離，但需要注意的是蛋白復性的步驟。一般采用鹽酸胍溶解包含體蛋白后，用稀釋的辦法進行復性，也可以利用凝膠過濾色譜進行復性（已有多種凝膠可以促進蛋白質的復性的報道）。以下以rhGM-CSF（重組人粒細胞 -巨噬細胞集落刺激因子）的下游純化工藝為例：
E.coli細胞，超聲破碎，離心收集包含體，用7mol/L鹽酸胍溶解包含體蛋白，作1：70稀釋使蛋白復性，加硫酸銨至一定濃度后，上樣于 Phenyl-Sepharose 6 FF（high sub）色譜柱，活性組分再上Q-Sepharose FF進行離子交換，最后上Superdex 75 prep grade凝膠進行凝膠過濾色譜，最終獲得了純度較高的rhGM-CSF，同時，DNA及內毒素去除率均很高。如下表所示：
步驟 體積（ml）蛋白（mg）內毒素（EU/ml）DNA（pg/ml）
起始（復性樣品）4344 490 421 180
HIC疏水柱 880 220 243 0.46
AIEX陰離子交換 620 88 251 0.14
GF凝膠過濾 1045 62 9 0.08
三、周質表達的蛋白的純化：
可用滲透壓休克方法，使周質釋放，然后利用擴張床技術將含有菌體的懸液直接上柱（STREAmlINE系列凝膠），菌體穿過而表達的蛋白上柱。