首先,將0.1cm的電擊杯放在冰上進行預冷,凍存的感受態細胞取出冰上溶解。
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然后,用100微升的感受態細胞加入1微升純化的連接液,或者加入0.5微升未純化的連接液,小心混勻,在冰上放置二十分鐘。
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然后,將混合液加入預冷的電擊杯中,注意擦干杯外的水,防止電火花,放入電轉化儀的反應槽內,接上電源。
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然后,在3kv、200電阻和25微F的BioRad電轉化儀,0.2電轉化杯,時間常數在4.5-5ms之間,然后進行點擊。
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然后,在聽到蜂鳴聲后,向電擊杯中迅速加入1ml37攝氏度的保溫的SOC液體培養基,將混合液洗出,轉移到1.5ml的離心管中。
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最后,在37攝氏度220-250r/min復蘇培養一小時,使其充分表達抗性,取適量涂平板,將平板倒置在培養箱中,37攝氏度下培養16-24小時。