在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌體克隆感染細菌后釋放至周圍培養基中的單鏈 DNA 進行凝膠電泳分析即可鑒定。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。
| 實驗方法原理 | 在本方案中，當外源 DNA 大于 200~300 個核苷酸時，用重組 M13 噬菌體克隆感染細菌后釋放至周圍培養基中的單鏈 DNA 進行凝膠電泳分析即可鑒定。 |
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| 實驗材料 | 重組 M13 噬菌體單鏈 DNAM13 噬菌體重組噬菌斑M13 噬菌體非重組載體噬菌斑大腸桿菌 F' 菌株 |
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| 試劑、試劑盒 | SDSSSC蔗糖凝膠加樣緩沖液 |
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| 儀器、耗材 | 瓊脂糖凝膠水浴 |
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| 實驗步驟 | 一、材料
1. 緩沖液和溶液
SDS ( 2%, m/V)
20 X SSC
蔗糖凝膠加樣緩沖液
2. 凝膠
瓊脂糖凝膠（0.7%）懸于 0.5 X TBE, 含 0.5 μg/ml 溴化乙錠
3. 核酸和寡核苷酸
重組 M13 噬菌體單鏈 DNA
4. 專用設備
水浴，調至 65℃
5. 載體和菌株
在上層瓊脂糖中的 M13 噬菌體重組噬菌斑
在上層瓊脂糖中，分離良好的 M13 噬菌體非重組載體噬菌斑
大腸桿菌 F' 菌株
二、方法
1. 取單個噬菌斑，按方案“M13 噬菌體液體培養”的方法，在適當 F' 宿主中生長，制備推定的重組噬菌體的原種。
2. 用帶有無菌吸頭的微量移液器從每個上清中各取 20 μl 至一新微量離心管，剩余上清 4℃ 保存，備用。
3. 在每個 20 μl 上清中各加入 1 μl 2% SDS, 輕拍管壁混合內容物，65℃ 溫育 5 min。
4. 在各管中加入 5 μl 蔗糖加樣緩沖液，再輕拍混合內容物，用 0.7% 瓊脂糖凝膠電泳分析，在 5 V/cm 條件下電泳，用已鑒定的帶有已知大小外源序列的 M13 重組體單鏈 DNA 作為陽性對照。
5. 溴酚藍遷移至膠末端后，在紫外線下照相。
6. 比較推定重組體釋放的單鏈 DNA 與那些作為對照的非重組噬菌體釋放的 DNA 的電泳遷移率。
7. 如果需要，可將凝膠上的單鏈 DNA 轉移至硝酸纖維素膜或尼龍膜，并用適當的放射性標記探針雜交，以確證外源 DNA 的存在。凝膠先用 10 倍體積的 20 X SSC 浸泡 45 min, 然后直接將 DNA 轉移至膜上。
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