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  • 發布時間:2022-10-03 20:22 原文鏈接: 金屬硫蛋白的提取方法介紹

      主要試劑:

      三羥甲基氨基甲烷(簡稱Tris);5,5-二硫二(2-硝基苯甲酸)(簡稱DTNB);PBS緩沖溶液。

      動物的處理:

      參考Onsaka等的方法,給家兔皮下注射ZnSO44次,第1天注射60mg/只(約15mg Zn/kg),第2、4天注射90mg/只,第7天注射120mg/只,第8天處死動物取其內臟。

      MT粗制品的制備:

      1)稱重:將前一夜放-4℃冰箱中解凍的試樣拿出來用托盤天平稱重,試樣重量M,精確到0.1g;

      2)攪碎:將試樣用剪刀剪成碎片后,用搗碎機搗約30~50s,搗成勻漿;

      3)提取:加入相當于試樣重量兩倍體積的0.02MTris-HCl,用磁力攪拌器攪約半分鐘;

      4)變性:加入等體積氯仿:乙醇(0.08:1)變性除雜蛋白,攪拌約5分鐘;

      5)離心:5000rmp、4℃離心25min,棄沉淀,取上清;

      6)熱變性:75℃熱變性3~5min除雜蛋白;

      7)過濾:用冰塊速冷后用8層紗布過濾,取清液,靜置約2h;

      8)離心:8000rmp、4℃離心25min,棄沉淀,取上清,得到勻漿液。

      9)層析、凍干:對勻漿液進行層析,然后收集富含MT的層析液進行凍干即得MT粗品。

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