所謂純化,也就是MT粗品(60%~90%)、MT精品(≥90%)以及純品(≥95%)的形成過程。由報道的資料看,純化方法大概是一致的,首先是根據MT-1和MT-2所帶電荷不同的性質,進行離子交換將MT-1和MT-2分開,然后將收集MT-1和MT-2的層析液分別進行脫鹽,最后收集凍干、保存。
取勻漿液直接上Sephadex G-50柱(4.5×100cm)進行分離,以0.01mol/LTris-HCl,pH8.6緩沖液洗脫。收集含MT組分層析液,再上預先用0.01mol/L Tris-HCl,pH8.6緩沖液平衡好的DEAE-Sepharose Fast Flow(3×70cm)柱進行離子交換層析,以Tris緩沖液進行直線梯度洗脫(A液:0.01mol/L Tris-HCl,pH8.6;B液:0.25mol/L Tris-HCl,pH8.6)。分別收集含MT-1和MT-2組分,冷凍干燥濃縮成體積15~20mL,再分別上預先用0.01mol/L碳酸銨平衡好的Sephadex G-25柱(1.6×120cm)進行脫鹽。所得MT-1和MT-2冷凍干燥后保存于-20℃冰箱中。
雖然文獻中講到許多分離純化方法,但是多為實驗室研究,真正運用到實際生產的并不多,這主要與實際生產中的各種環境因素的影響有關。在實驗中發現,誘導后家兔肝臟中MT的含量愈高,實際生產中MT的提取率就愈大,相反,MT的提取率就愈低。