1.2 方法
1.2.1 高脂飲食模型建立
將10只雌性大鼠隨機分成兩組，每組5只。對照組用普通飼料喂養15周，高脂組用自制高脂飼料喂養15周。所有大鼠在造模期間自由攝食和飲水，飼料和水每2日更換1次。
1.2.2 行為學檢測
1.2.2.1 曠場實驗
曠場實驗箱(長×寬×高：100 cm×100 cm×50 cm)，箱底標記成25個相等方格(20 cm×20 cm)，沿四壁的16個方格稱為外圍格，其余9個方格為中央格。進行實驗時將大鼠放于正中央格，攝像并記錄5 min大鼠穿行中央格格數、穿行的總格數以及中央格停留時間。在中央格停留時間占總時間(5 min)百分比與大鼠的焦慮樣情緒呈負相關。穿越總格數反映動物的運動功能。
1.2.2.2 非競爭性掠食行為觀察
掠食模型參照Li等的方法：動物掠食行為的觀察在一單獨、安靜、隔音的房間內進行，房間內放有曠場(長×寬×高：150 cm×150 cm×50 cm)，曠場底及四壁為黑色，待測大鼠進行掠食行為觀察前，需節食1周，每天給予少量食物，足量飲水，使體質量降到之前的80%左右；然后在觀察前1 d禁食(不禁水)12 h，觀察當日下午4:00將大鼠放入曠場中，適應2 h后，于曠場一側放入一塑料制鼠籠(長×寬×高：30 cm×18 cm×16 cm)，將250 g標準的大鼠顆粒狀飼料放于鼠籠的鐵絲網頂蓋上，2 h后，分別收集鼠籠頂蓋上剩余飼料以及散落在曠場中的飼料，并分別稱重。散落在曠場中的飼料量即為大鼠掠食量。
1.2.2.3 競爭性掠食行為觀察
觀察設備同非競爭掠食行為觀察，觀察前禁食(不禁水)12 h，觀察當日下午4:00將大鼠放入曠場中，適應2 h后，于曠場一側放入一塑料制鼠籠(長×寬×高：30 cm×18 cm × 16 cm)，鼠籠中放置一只同待測大鼠性別相同，來源于不同窩，之前從未接觸的大鼠。將250 g標準的大鼠顆粒狀飼料放于鼠籠的鐵絲網頂蓋上，2 h后，分別收集
散落在曠場中的飼料以及鼠籠頂蓋上剩余飼料，并分別稱重。散落在曠場中的飼料量即為大鼠掠食量。
1.2.3 大鼠前扣帶皮質 c-Fos 蛋白免疫組織化學檢測在大鼠非競爭性掠食進行1 h 45 min時，迅速取出大鼠，用10%水合氧醛(40 mg/kg)于大鼠腹腔注射麻醉后迅速取腦，將腦組織置入固定液中后固定過夜，再分別置于15%，30%蔗糖PBS液中浸糖至沉底，用最佳切割溫度(optimal cuttingtemperature，OCT)復合物包埋，置于恒溫冰凍切片機連續切片，片厚30 m，取含前扣帶皮質的切片。采用免疫組織化學ABC法對切片行c-Fos免疫組織化學染色、Olympus顯微鏡觀察。對照組與高脂組各選取3張切片，拍照并計數10×10倍鏡視野下陽性細胞。
1.3 統計學處理
數據以均數±標準差(x±s)表示，采用GraphPadPrism 5.0軟件進行統計分析，兩組間比較采用成組t檢驗，以P<0.05認為差異具有統計學意義。
2 結 果
2.1 行為學檢測
2.1.1 曠場實驗
曠 場 實 驗 結 果 如 圖 1 所 示 ： 中 央 格 停 留時間百分比，高脂組(10.43%±2.87%)與對照組(12.23%±2.79%)相比，差異無統計學意義( t = 0 . 4 5 0 ， P = 0 . 6 6 4 7 ) ；穿行總格數，高脂組( 1 2 7 . 1 0 % ± 3 7 . 8 9 % ) 與對照組 ( 9 8 . 9 0 % ± 1 7 . 1 5 % ) 相比，差異無統計學意義(t=0.676，P=0.5172)。
2.1.2 掠食行為
掠食行為結果如圖2所示：對照組大鼠在非競爭性掠食行為、競爭性掠食行為觀察中，每2 h掠食量分別為(84.80±2.77) g，(89.94±1.96) g。高脂組在非競爭性掠食行為、競爭性掠食行為觀察中，每2 h掠食量分別為(13.85±1.08) g，(12.25±1.07) g；與相應對照組相比掠食量減少(非競爭性掠食行為t=21.65，P<0.001；競爭性掠食行為t=32.17，P<0.001)。
2.2 大鼠前扣帶皮質 c-Fos 蛋白免疫組織化學檢測如 圖 3 所 示 ： 對 照 組 陽 性 細 胞 數 為( 8 8 . 1 7 ± 4 . 1 4 ) 個 / 視野，高脂組陽性細胞數為(45.00±2.56)個/視野，對照組陽性細胞數目高于高脂組(t=8.868，P<0.001)。
3 討 論
掠食行為是一種高度綜合的模型，可用于探討心理學、生理學、神經生物學等多學科的不同問題；同時，掠食行為也是行為科學理論研究的重要模型，掠食行為與決策、努力付出、成本/效益估計等認知功能密切相關。利用掠食行為闡明長期高脂飲食對認知功能的影響，探究長期高脂飲食對大鼠掠食行為的影響及機制，對人們的健康具有指導意義。
許多研究者利用嚙齒類動物掠食行為探討認知功能的神經生物學機制之前，往往要對動物進行人為訓練，過多的訓練影響大鼠的行為自主性，從而影響到掠食行為結果，不能反映其真實的神經生物學本質。因此，筆者采用了Li等的實驗室大鼠掠食行為觀察模型排除了人為因素對大鼠掠食行為的影響，并且定量測定大鼠的掠食行為，探討其神經生物學機制。
曠場實驗是評價嚙齒類實驗動物運動功能和狀態焦慮的經典方法。我們以此來判定不是由運動能力、探究行為、動物情緒等改變造成動物掠食行為障礙。對照組與高脂組礦場實驗結果表明，兩組差異無統計學意義，提示高脂飲食對大鼠運動功能無影響。
本研究發現高脂組大鼠在非競爭性掠食行為、競爭性掠食行為中掠食量較對照組明顯減少，這提示高脂組大鼠不愿付出努力去獲取更多的食物，表明高脂飲食確實會影響大鼠掠食行為。
中樞神經系統多個腦區以及多種化學物質參與調控嚙齒類動物的掠食行為。前扣帶皮質位于前額葉的內側部分，參與調控認知、學習、社會評估等復雜行為。前扣帶皮質受到毀損的靈長類個體在強化介導的選擇任務中不能正確地整合風險和回報。嚙齒類動物前扣帶皮質受損研究表明：前扣帶皮質受損的大鼠放棄“付出越多得到越多”的行為，更愿意少花力氣獲得少的收入。李明波等研究表明：雙側前扣帶皮質損毀后的大鼠掠食行為明顯受損，其中競爭性掠食量下降最為明顯。本研究結果顯示高脂組大鼠的掠食量明顯減少，推測高脂飲食大鼠掠食行為障礙可能與前扣帶皮質功能改變有關。c-Fos蛋白作為參與細胞內信號轉導功能的第三信使，其表達可反映神經元對某種刺激的活動情況，常被作為神經元激活的標志。本研究中高飲食大鼠在掠食過程中前扣帶皮質內c-Fos表達明顯減少，提示長期高脂飲食影響大鼠掠食行為的機制可能與前扣帶皮質區神經元功能下降有關；具體的機制仍需進一步的探討。