間質干細胞成脂和成骨誘導分化

成骨和成脂誘導是鑒定干細胞的一種重要的方法，也是zui常用、報道見得zui多的方法。成骨zui常用的染色方法是茜素紅染色（堿性磷酸酶），成脂誘導zui常用是Oil Red O （油紅O）染色法。下面介紹一下這兩種染色方法的原理和步驟。
成骨誘導分化
茜素紅染色方法和原理：茜素紅又名茜素磺酸鈉，茜素S，茜素紅S，茜素胭脂紅，1,2-二羥基蒽醌-3-磺酸鈉，1,2-二羥基蒽醌-3-磺酸鈉鹽。橙黃色或黃棕色粉末。易溶于水，微溶于乙醇，不溶于苯。1%水溶液pH 為2.15，其水溶液呈淺黃褐色，加鹽酸后變成黃色，加氫氧化鈉后則變成藍紫色。有刺激性。能與許多金屬離子生成帶色化合物，能與鋯、釷、鋁、鈦及鈹和鈣的顯色反應。染色的原理就是茜素紅和鈣發生顯色反應，產生一種深紅色的帶色化合物，這樣成骨誘導的細胞外面沉積的鈣結節也就被染成了深紅色。

成骨誘導的過程是使鈣離子能夠以鈣鹽的方式沉淀下來，這就是我們常說的“鈣結節”。鑒定鈣結節的染色方法常用“茜素紅”。

步驟：
（1）吸去誘導液，再PBS 洗一到兩次；
（2）加入10％中性甲醛，固定30min-60min；
（3）吸去固定液，加入0.1%的茜素紅染色液，染色6-10min；
（4）用PBS 洗兩次，去處殘留的染色液；
（5）加入PBS，完成染色。
干細胞成脂誘導分化
Oil Red O（油紅O）染色的方法和原理：Oil Red O（油紅O）又名為1-［2,5-二甲基-4-(2,5-二甲基苯偶氮)苯偶氮］-2 萘酚，蘇丹紅5B，溶劑紅27。紅色粉末。是一種油溶性偶氮染料。易溶于苯，溶于乙醇(呈淺黃色紅色)和丙酮。生物染色劑,淀粉凝膠電泳中作類脂和脂肪染色。顯微技術中用作脂肪染色劑。作為脂肪細胞的染色劑的原理是使用Oil Red O 的油溶性，對其它的細胞結構著色性差。

成脂肪誘導的過程中，細胞在胞漿中不斷有油滴的累積，并不斷的增加變大，zui后整個細胞的胞漿中都是油滴。Oil Red O染色的方法是對油滴的染色的一種方法。

步驟：
（1）吸去誘導液，再PBS 洗一到兩次；
（2）加入10％中性甲醛，固定60min；
（3）吸去固定液，加入現配和過濾后的Oil Red O 染色液，染色60min；
（4）用PBS 洗2-5 次，去處殘留的染色液和殘渣；
（5）干細胞加入PBS，完成染色。