實驗方法原理 用合適光學顯微鏡特性的培養小室培養細胞。顯微鏡裝有氣記錄儀連接的攝像機，附加設備為細胞培養提供理想的溫度。在記錄過程中，通過控制器觸發每次曝光。控制器也控制快門，以便排除對細胞不必要的照明。
試劑、試劑盒 培養液胰蛋白酶和EDTA混合液
儀器、耗材 蓋玻片塑料皮氏培養皿顯微鏡不碎透明塑膠箱計算機控制的快門和濾片輪攝像機計算機圖像軟件IPlab
實驗步驟
1. 打開所有設備的開關，特別是加熱器。最好先打開加熱器的開關，使透明塑膠箱（將顯微鏡封入，裝有1 個可控加熱系統。這個可控加熱系統是用控制器（2082793)、溫度探棒（2194674)、加熱器元件（224565)和低噪音交流電風機（583-325)定制的（RS Components，UK )）內的溫度恒定。
2. 用胰蛋白酶和 EDTA 混合液（0.25% 胰蛋白酶（Difco) 和 0.5 mmol/L EDTA ）消化黏附的培養細胞，制成細胞懸液。
3. 在皮氏培養皿中的蓋玻片（18 mm×18 mm , No 1.5 ( Merck )。用濃硫酸浸洗后，在超純水中用 Teflon 蓋玻片容器（Eppendorf ) 反復煮沸，最后用高壓滅菌器滅菌。）上接種約 20000 個細胞，在 37°C 和含 3% CO2 的濕潤條件下將細胞放置過夜。
4. 將蓋玻片封在菲薄小室上。小室應充滿培養液（MEM，含有 Hank’s 鹽、12 mmol/L 碳酸氫鈉、10% 小牛血清和 4 mmol/L L-谷氨酰胺。），并留 1 個小氣泡以確保由 Hank’s 鹽平衡 CO2。用熱蠟混合物原位封固蓋玻片。
菲薄小室：
(a)1 mm 厚的玻璃片，中央有 1 個直徑為 15 mm 的孔。用 #3 蓋玻片將孔蓋住，再用紫外線處理的玻璃膠（Southern Watch and Clock Supplies) 將蓋玻片粘到有孔玻片上。
(b)用 70 % 乙醇將小室消毒，隨之用清潔的空氣吹干。
(c) 蠟混合物：蜂蠟（Fisher )、軟黃色石蠟（Fisher ) 和石蠟（熔點為 46°C；Fisher )，以 1 : 1 : 1 的比例配制。
5. 應用相應的顯微鏡（Axiovert 135 TV ( Zeiss)）技術，例如有 LD 消色平場 32×/0.4Ph2 物鏡的位相差和熒光。較短工作距離的高放大率物鏡需配有正置顯微鏡，以便觀察在小室頂上運動的貼壁細胞。
6. 為獲取圖像準備計算機：
(a)用鏡臺測微尺標定圖像大小。
(b)選擇曝光時間。通常 0.1s 對于位相差圖像是足夠的，而弱的熒光圖像需較長的曝光時間，0.4s 或 0.4s 以上。
(c)選擇攝像間隔時間、圖像數目和文件名。分析細胞在緩慢運動中的移位時，成纖維細胞樣的細胞在 5 min 間隔中將有滿意結果。觀察變化較快細胞的形態時，將需要 1 min 或甚至更短的間隔時間。另外，快速運動細胞的移位將需要 1 min 或更短的間隔時間，如中性白血細胞。
(d)按下列程序以便交替出現相差圖像和熒光圖像：
(i)建立編入索引的文件名，以便于保存。
(ii)插入 START 標記。
(iii)使用熒光濾片輪，打開弧燈快門。
(iv)用適當的曝光時間充分獲取熒光圖像。
(V)使用相差濾片輪，關閉弧燈快門。
(vi)保存熒光圖像。
(vii)打開鹵素燈快門。
(viii)用適當的曝光時間充分獲取相差圖像。
(ix)關閉鹵素燈快門。
(x)保存相差閣像。
(xi)暫停間隔記錄。
(xii)關閉所有程序窗口。
(xiii)消除 START 標記，除非已經記錄了指定數目的圖像。
(xiv)停止程序。
可分別觀察分開記錄的相差和熒光攝像結果或用 IPLab 軟件結合起來觀察。
7. 用 CD 刻錄機儲存圖像結果。