實驗方法原理
進行限制酶切割反應只需簡單地將酶和DNA樣品放在合適的反應緩沖液溫育，其中DNA和酶的量、緩沖液的離子強度、溫育溫度和時間都依具體的反應而改變。
實驗材料 DNA
試劑、試劑盒 TE酶切緩沖液EDTA
儀器、耗材 電泳儀
實驗步驟
1. 混合下列溶液于一個無菌的微量離心管中
（1）x μl DNA
（2）2 μl 10×酶切緩沖液
（3）18-x μl H2O
（4）20 μl 的反應體積可以方便地用于聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠電泳分析。
（5）只要反應混合物中其他成分的比例保持一定，可增減待切割DNA的量和反應條件。
2. 加入限制性內切酶（1~5 U/μg DNA）在推薦的溫度溫育1 h （—般是37℃）。
3. 理論上，1 U 限制性內切酶在推薦的反應條件下，60 min 內可完全消化1 μg 純化的樣品。
4. 酶的體積應低于反應總體積的1/10，因為酶液中的甘油可以干擾反應。
5. 加入5 μl 電泳加樣緩沖液終止反應，進行瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳。
6. 反應也可通過加入0.5 μl 0.5 mol/l EDTA（終濃度為12. 5 mol/l） 以螯合鎂離于而終止。
7. 很多酶再65℃溫育10 min 可被不可逆滅活，有些不能在65℃熱失活的酶在75℃溫育15 min 也能失活。
8. 如果酶對熱具完全抗性，可遍過酚抽提和乙醇沉淀或通過硅基質懸浮法來純化DNA。