限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease），又簡稱限制酶或內切酶。
它們是基因工程和基因診斷重要的一類工具酶。它們的發現和應用為從基因組中分離目的基因提供了必要的手段.限制酶能特異地識別和切割特異的核苷酸序列，將雙鏈DNA切成較小的片段。
酶切后目的基因可能完整地或部分地保存于某一DNA片段上，并被分離出來。
