隨機引物法標記探針

實驗概要

本實驗探針標記采用TAKARA公司的隨機引物標記試劑盒Ver.2。

實驗步驟

1．于1.5ml離心管中加入5μl H₂O，2μl引物(N6)，5μl DNA(0.1μg-1μg)。

2．充分混勻，98°C 3分鐘。

3．離心1秒鐘，將離心管蓋上的汽化水甩下。

4．加入2.5μl dNTPs(各2.5mM)，3μl緩沖液，6μl H₂O，1μl Klenow酶。充分混勻，置于冰上，拿到同位素室。

5．加入1μl ³²P-dCTP，37°C 10分鐘。

6．加入100μl TE，混勻上到已在大管中加好4μl 6N NaOH的Sepherdex-G50柱,室溫下3000rpm離心3分鐘。

7．再加入100μlTE。室溫下3000rpm離心3分鐘。

8．將大管中標好的探針加到雜交管中雜交即可。