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一、材料
1. 緩沖液和溶液
醋酸氨（10 mol/L)
牛血清白蛋白（10 mg/ml)
乙醇
溴化乙啶（10 mg/ml）或 SYBR Gold 染液
NA 終止/貯存緩沖液（50 mmol/L Tris-Cl (pH 7.5)，50 mmol/L NaCl，5 mmol/L EDTA (pH8.0)，0.5% (m/V) SDS）
5X 隨機引物緩沖液（250 mmol/L Tris (pH 8.0)，25 mmol/L MgCl2，20 mmol/L DTT，未標記的 dNTP 各 2 mmol/L，1 mol/L HEPES ( 用 4 mol/L NaOH 調至pH 6.6），1 mg/ml 長度為 6 個堿基的隨機脫氧寡核苷酸引物）
2. 酶和緩沖液
大腸桿菌 DNA 聚合酶Ⅰ Klenow 片段
3. 凝膠
堿性瓊脂糖凝膠或變性聚丙烯酰胺凝膠
4. 核酸和寡核苷酸
長度為 6 或 7 個堿基的隨機脫氧核苷酸引物（125 ng/μl TE，pH 7.6 )
模板 DNA
5. 放射性復合物
[α-32P] dNTP ( 10 mCi/ml，比活性 >3000 Ci/mmol）
6. 專用設備
沸水浴
Sephadex G-50 離心柱，用 TE ( pH 7.6) 平衡
二、方法
1. 電泳后用溴化乙錠（終濃度 0.5 μg/ml）或 SYBR Gold 染膠，切下所需條帶，盡可能切去多余的凝膠。
2. 將切下的條帶放入預先稱過重量的微量離心管中，稱出帶的重量。每克瓊脂糖凝膠加水 3 ml。
3. 將微量離心管放在沸水浴中煮 7 min 以使凝膠融化，同時也使 DNA 變性。
如立即進行標記，可將離心管置于 37℃，直至需要加入模板；否則可貯存于 -20℃。但每次從 -20℃ 取出后，含 DNA 的凝膠團要在 100℃ 加熱 3~5 min，然后置于 37℃ 直至放射性標記反應開始。
4. 將一個新的微量離心管置于 37℃ 水浴或加熱板上，按下列次序加入：
5X 寡核苷酸標記緩沖液 10 μl
10 mg/ml 牛血清白蛋白溶液 2 μl
DNA ( 體積不超過 32 μl） 20~50 ng
10 mCi/ml [α-32P] dNTP 5 μl
( 比活性 >3000 Ci/mmol）
Klenow 片段（5 單位） 1 μl
水 加至 50 μl
用微量加樣器徹底混合各組分，于室溫溫育 2~3 h 或 37℃ 溫育 60 min。
5. 在反應液中加入 10 μl NA 終止/貯存緩沖液，可根據需要進行以下步驟。
貯存放射性標記的探針于 -20℃ 以備雜交用。
或
通過離心柱層析分離放射性標記的探針與未結合的 dNTP 或以乙酸銨和乙醇選擇性地沉淀放射性標記的 DNA。如果 >50% 的放射 性 dNTP 已在反應中摻入，可不進行該步驟。
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