在各種微生物中分布廣泛，特別在細菌中更為廣泛。由蠟狀芽孢桿菌Bacillus cereus 5/B與B. cereus 569分別得到分子量為35200與31500的青霉素酶結晶，從巨大芽孢桿菌B. megaterium 提取出α，β，γ青霉素酶結晶，隨后從不同細菌又分離出多種青霉素酶。青霉素酶對熱極不穩定，分解β-內酰胺的速度因青霉素與酶的種類不同而異，但對6-氨基青霉烷酸（6-APA）作用卻很微弱。酶反應最適PH值為6.0～6.5. 以青霉素G鉀鹽為底物，Km為4.32×10-3M(5/B酶)；
4.89×10-3M(569酶)。細菌產生青霉素酶導致出現耐藥性，臨床上已分離出多種類型青霉素酶，白色粉末。分子量50000。溶于水。酶溶液易失活，凍干品2～8℃可穩定一周。青霉素酶作用于青霉素的β-內酰胺環，使青霉素轉變為無抗菌活性的青霉素酮酸（penicilloic acid）。醫療上用于青霉素過敏癥狀的治療。青霉素酶在實驗中用于破壞或抑制青霉素活性。