（1）丙磺舒、阿司匹林、保泰松、磺胺藥對青霉素的排泄有阻滯作用，合用可升高青霉素類的血藥濃度，也可能增加毒性。
（2）氯霉素、紅霉素、四環素類等抑菌劑對青霉素的殺菌活性有干擾作用，不宜合用。
（3）重金屬離子（尤其是銅、鋅、汞）、醇類、酸、碘、氧化劑、還原劑、羥基化合物及呈酸性的葡萄糖注射液或四環素注射液都可破壞青霉素的活性，禁忌配伍，也不宜接觸。
（4）胺類與青霉素G可形成不溶性鹽，使吸收發生變化。這種相互作用可利用以延緩青霉素的吸收，如普魯卡因青霉素。
（5）青霉素G鈉溶液與某些藥物溶液（兩性霉素、頭孢噻吩、鹽酸氯丙嗪、鹽酸林可霉素、酒石酸去甲腎上腺素、鹽酸土霉素、鹽酸四環素、B族維生素及維生素C）不宜混合，因可產生混濁、絮狀物或沉淀。