實驗材料 探針
試劑、試劑盒 PBS鏈親和素HRPODAB雙氧水甘油二氨基聯苯胺
儀器、耗材 蓋玻片水浴鍋
實驗步驟
1. 以生物素酰化探針與載玻片上樣品雜交并洗片（“熒光原位雜交實驗”基本方案1~6步）。
2. 由1×SSC中取出玻片，盡可能吸去殘留玻片上的緩沖液，但不要使玻片干涸。加200 μl 封阻液于玻片上，放24 mm×60 mm 的蓋玻片于封阻液上，將載玻片放于裹以鋁箔的加濕盒中，置37℃溫育30 min。
3. 從加濕盒中取出玻片，傾斜使蓋玻片滑掉，盡可能吸去殘留封阻液，但不使玻片干燥， 加200 μl 鏈親和素液于載玻片上，放蓋玻片于液體上，玻片放入裹以鋁箔的加濕盒中，置37℃溫育30 min。
4. 從加濕盒中取出玻片，傾斜使蓋玻片滑掉，將載玻片放入含42℃ 0.1% Tween 20/PBS的Coplin廣口瓶中，將瓶放入42℃振蕩水浴中搖5 min，用42℃ 0.1%Tween 20/PBS重復洗片2次。
5. 取出玻片，徹底吸去殘液，不要使玻片干涸，加200 μl 生物素酰化HRPO溶液于玻片上，其上蓋以24 mm×60 mm 蓋玻片，放在裹以鋁箔的加濕盒中，置37 ℃溫育30 min。
6. 接歩驟4，重復洗片。
7. 從洗液中取出玻片，徹底吸去殘留液，不要使玻片干涸。加0.015%H2O2于DAB底物液中，立即加200 μl DAB底物液于玻片上，其上蓋以24 mm×60 mm 蓋玻片，于室溫暗處放10~20 min。
8. 顏色沉淀呈肉眼可辨，室溫下，以PBS洗片5 min 終止反應。
9. 如需要，可做熒光復染以鑒別胞核（“熒光原位雜交實驗”，步驟9）。
10. 用90%甘油或適當的防褪色固片介質，加蓋玻片，用相差顯微鏡觀察或照相。