不標記抗體法通過系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織中的抗原進行定位檢測。分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。用于（1）抗體觀察（2）免疫學研究。
| 實驗方法原理 | 標記抗體法雖然具有許多優點，但也存在一些難以克服的問題，如標記抗體的分子增大，對細胞膜和組織的穿透力減弱；化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響；結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合，影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素，通過一系統的非標記抗體的免疫學反應，對組織中的抗原進行定位檢測。不標記抗體法又可分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。前者利用基因工程方法制備雙特異性抗體的F(ab')2，一個Fab片段與標本中的抗原結合，一個Fab是抗體蛋白的結合片段。在抗體與標本作用后，再加入鐵蛋白與抗體結合，從而顯示組織內抗原的所在部位。后者則用磷酸鎢負染后，直接電鏡觀察。 |
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| 實驗材料 | 病毒材料 |
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| 試劑、試劑盒 | 抗體磷鎢酸瓊脂糖 |
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| 儀器、耗材 | 高速離心機銅網Fomnvar膜透射電子顯微鏡離心管 |
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| 實驗步驟 | 一、材料及試劑 1. 待檢病毒材料 如糞便，氣管分泌物、腦脊髓液、組織培養液等。 2. 高速離心機 3. 已知抗體 4. 磷鎢酸 5. 瓊脂糖 6. 其它 二、操作方法 1. 將被檢病毒材料0.9 ml，加1︰5～1︰10稀釋的特異性免疫血清0.1 ml充分混合。 2. 置37℃作用1 h或37℃1 h后再置4℃過夜。 3. 以17 000 r/min～23 000 r/min離心90 min。 4. 吸去上清，將離心管口倒置于濾紙上，吸去殘留液體。 5. 沉淀物中加少量H2O混懸，用3%磷鎢酸(pH6.0)負染20 s～30 s，滴加于400目銅網Fomnvar膜上，用濾紙從銅網邊緣輕輕吸去多余的負染液。 6. 在透射電鏡下4x104倍觀察。 三、結果判定 直接觀察病毒粒子的形態。由于離心濃縮的處理和特異性抗體的加入，大大提高了觀察的敏感性。 展開 |
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| 注意事項 | 1.固定劑 固定是免疫電鏡較關鍵的一步，免疫電鏡中的固定與一般超薄切片中的固定的不同之點在于既考慮保存細胞的超微結構，又要考慮到抗原的失活性問題。 固定液的選擇：目前，較廣泛應用的固定液為醛類：甲醛、多聚甲醛。戊二醛等。有很多研究者應用4%多聚甲醛和0.05%——0.5%戊二醛混合液，聯合應用這兩種固定液是因為：1.戊二醛在組織中的穿透速度相對多聚甲醛要慢。有些組織（如神經組織）在未及時固定短暫缺氧后就會引起膜結構的破壞，不利于組織超微結構的保存，因而組織需及時、快速的固定，而醛類中以多聚甲醛在組織中穿透最迅速、固定最及時，2.多聚甲醛能較好的保存組織的抗原性，但對組織結構的保存不理想，而戊二醛是一種二醛基雙功能試劑，能較好的交聯組織蛋白保持組織的超微結構，因而二者經常聯合使用。
2. 固定劑的要求：①不損害細胞內抗原的活性；②固定速度快、效果好；③分子量小，易于滲透；④固定后，不引起交聯，造成空間的阻礙，影響標記抗體進入抗原位。 3. 非特異性吸附與酶標抗體、抗血清的稀釋度、染色時間，溫度及介質等有關，其中最主要的是抗血清及標記抗體的稀釋。一般認為高效價抗血清或標記抗體稀釋到低蛋白濃度，用于標記染色可獲得最理想的結果。 展開 |
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