徐修禮，張建芳，樊新，孫怡群
（第四軍醫大學西京醫院檢驗科，陜西 西安 710032）
摘要：目的 探討革蘭陰性桿菌感染患者和正常健康人群血漿內毒素水平及臨床意義。方法 分別用定量動態比濁法和鱟試劑定性凝膠法檢測革蘭陰性菌感染患者和正常健康對照血漿內毒素含量。結果 正常對照組血漿內毒素定量3.30±1.73pg/ml，定性全部為陰性；革蘭陰性菌感染組內毒素945±2244.43 pg/ml,定性陽性率為68.19%。經SPSS統計軟件T-檢驗分析，對照組與革蘭陰性菌感染組內毒素平均值差異顯著（t=2.608,P=0.025），相關性分析表明定量動態比濁法和鱟試劑定性凝膠法在0.01水平相關。結論 檢測血漿內毒素含量有助于早期判斷感染的細菌種類及是否存在內毒素血癥，有利于臨床合理應用抗菌藥物和及時對癥處理。
關鍵詞：內毒素；革蘭陰性桿菌；內毒素血癥；檢測方法
中圖分類號：378.2 文獻標識碼：A
Clinical significance of plasma endotoxin detecting of patient with gram negative bacillus infection
XU Xiu-li,ZHANG Jian-fang,FAN Xin,SUN Yi-qun
(Clinical Lab. of Xijing Hospital,the Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,China)
Abstract:OBJECTIVE To study the Clinical significance of plasma endotoxin detecting of patient with gram negative bacillus infection. METHODS Plasma endotoxin of patient and healthy people were detected by turbidimetric assay and gel-clot assay with limulus reagents. RESULTS Mean plasma entoxin of healthy people was 3.30±1.73pg/ml and gel-clot assay were all negative.In gram negative bacillus infection group, the result was 945±2244.43 pg/ml and positive rate of gel-clot assay was 68.19%.T-test analysis indicates the mean plasma entoxin of two groups have notable difference(t=2.608,P=0.025). Relativity analysis indicates there was correlation between turbidimetric assay and gel-clot assay on 0.01 level. CONCULION Plasma endotoxin detecting is helping to estimate what kind of bacteria infected and endotoxemia. It is also significant to select antibacterial reagents nationally and handle syndrome on time.
Key words: Endotoxin；Gram negative bacillus；Endotoxemia；Detecting method
內毒素是革蘭陰性細菌細胞壁結構中的類脂多糖體（脂多糖），此種脂多糖經細菌胞壁合成后被轉運到細胞表面構成胞壁外膜的組成成分，在細菌死亡溶潰后從細胞結構中釋放出來。內毒素及其活性中心（類脂A）對宿主具有 多種毒害作用，例如內毒素使實驗動物產生發熱、影響白細胞、施瓦茲曼（Shwartzman）反應、激活補體和凝血系統及降低血壓等毒性作用，從而造成組織損傷并與許多臨床病象有密切關系。另一方面它又可發揮諸多對機體有益的生物學活性，適量的內毒素可增強機體非特異性免疫的作用，能夠抗感染、抗輻射，并能增強網狀內皮細胞的活力，并具有使腫瘤壞死消退的活性。
近年來國內外報道革蘭陰性菌感染有逐年增加的趨勢，故快速診斷革蘭陰性細菌所致的敗血癥和內毒素血癥已被臨床越來越重視。但現有的細菌學檢查需時間較長，且由于抗菌藥物的廣泛應用使培養陽性率降低。現在更多的報道已闡明內毒素血癥可存在于無菌血癥的各種情況，如網狀內皮系統功能障礙；腸道粘膜損傷；局部陰性細菌感染；污染大量內毒素的注射藥品、輸液及輸血等。以鱟試驗定量比濁法來檢測內毒素，能對內毒素血癥、革蘭陰性細菌敗血癥和革蘭陰性細菌感染的病人做出早期診斷和對癥治療，以助于病人的早期康復。
1. 材料和方法
1.1病例選擇 我院住院的肺部革蘭陰性菌感染患者22例，年齡18-87歲，革蘭陰性菌菌血癥10例，年齡2-71歲，均經培養證實為革蘭陰性菌感染；正常健康對照30例，來自我院健康查體者。
1.2材料 MB-80微生物快速動態檢測系統、T01智能恒溫儀、冰浴槽以及EKT-5M Set動態內毒素檢測試劑盒均由北京金山川科技發展公司提供。內毒素定性鱟試劑購自福州新北生化工業有限公司。
1.3方法
1.3.1血漿制備 用含有少許無菌抗凝劑(肝素鈉)的無熱原玻璃注射器或一次性采血管采取靜脈血1-2ml,緩慢放入無熱原離心管中,用無熱原鋁箔封閉管口以防污染,然后進行3000rpm離心60s分離得富血小板血漿(簡稱PRP),取出后立即放入冰水浴中直到下一步,若暫時不用,可在-30℃冰箱中保存1個月。取上述富血小板血漿0.05ml，加入裝有0.45ml樣品處理液中，混勻后70℃保溫10min，取出后立刻放入冰水浴中，即為待測血漿樣品。
1.3.2測定分析 取待測血漿0.2ml直接加入反應主劑中，溶解后使用微量加樣器轉移至10×75mm標準玻璃反應管中（不要產生氣泡），插入MB-80微生物快速動態檢測系統中進行反應，反應結束后由標準曲線自動計算出待測血漿中內毒素含量。注意避免微生物及細菌污染。所有標本同時用鱟試驗定性凝膠法測內毒素作為對照。
2.結果
正常對照組血漿內毒素定量3.30±1.73pg/ml，定性全部為陰性；革蘭陰性菌感染組內毒素945±2244.43 pg/ml，其中肺部感染者內毒素定量160.41±222.78 pg/ml，定性法7例為陰性，15例陽性，陽性率68.19%；菌血癥患者內毒素定量2671.7±3523.91 pg/ml，定性全部為強陽性。經SPSS統計軟件 T-檢驗分析，對照組與革蘭陰性菌感染組內毒素平均值差異顯著（t=2.608,P=0.025），相關性分析表明儀器定量法與凝膠定性法在0.01水平相關。