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  • 發布時間:2022-04-13 17:02 原文鏈接: 鞣酸化紅細胞試驗紅血球的處理

      1.新鮮紅血球新鮮紅血球用阿氏液保存于4℃,可供3周內使用。采用新鮮紅血球做凝集反應,模型新鮮,典型,而且敏感性也比醛化紅血球高出1~2個滴度。但用新鮮紅血球致敏后,保存時間短,而且不同動物個體和不同批次來源的紅血球均有差異,影響試驗結果和分析。為了克服這一缺點,多采用醛化紅血球或鞣化紅血球。

      2.紅血球醛化極其優點

      (1)醛化方法:常見的醛化劑有甲醛、戊二醛和丙酮醛。

      甲醛醛化過程:①將紅血球用pH7.2PBS反復洗滌4次,以除去血清蛋白以及紅血球表面的膠體物質;②按1︰8的比例取紅血球(壓積)和3%甲醛液(用pH7.2PBS稀釋,預先冷卻至4℃),緩慢混合,加膠塞4℃作用24h,不時搖動;③傾去上清液,再以1︰2(V/V)加入36%~38%冷的(10℃)甲醛溶液,混勻,再放入4℃24h;④⑷離心去上清,以生理鹽水反復洗滌4次。徹底清除甲醛液,最后以生理鹽水配成10%懸液甲醛化紅血球,加1/萬硫柳汞防腐,4℃保存。

      戊二醛醛化過程:①取新鮮紅血球,以生理鹽水洗滌4次;②以0.15Mol/L pH 7.2 PBS配成1%戊二醛溶液,4℃保存備用;③將100ml 1%冰冷的戊二醛液加入到10ml~15ml紅血球中,邊加邊攪拌(也可置電磁攪拌器上)30min;④離心去上清,以生理鹽水洗滌4次,最后以PBS液(或生理鹽水)配成10%懸液,加1/萬硫柳汞,4℃保存。

      丙酮醛—甲醛雙醛化過程:①取新鮮紅血球,洗滌4次,配成8%的懸液;②于紅血球懸液中加等量的3%丙酮醛室溫電磁攪拌16h~18h;③洗滌5次,再配成8%的懸液;④于紅血球懸液中加等量的3%甲醛,電磁攪拌16h~18h;⑤洗滌5次,最后以pH 7.2 PBS配成10%的懸液,加1/萬硫柳汞防腐,4℃保存。

      (3)醛化紅血球的優點:①性質穩定,不影響紅血球表面的吸附能力;②重復性好,易標準化。③可較長期保存,醛化后4℃保存,有效期可至1年,如凍干保存,有效期則更長。

      (4)影響醛化的因素:①紅血球的潔凈程度:由于紅血球表面殘留血漿蛋白和其它膠質,易引起自家凝集,所以一定要充分洗凈;②紅血球的濃度:醛化時應盡量使紅血球稀釋度低一些,以減少紅血球的凝集和變形;③醛化時的溫度與醛化紅血球的質量有很大關系,一般認為最好是37℃。但有人認為應于4℃進行醛化;④醛化劑的濃度和醛化次數:醛化劑的濃度過大,易引起紅血球皺褶,濃度過低,又會增加溶血機會,所以一般以3%醛化濃度為宜。家禽紅血球一般醛化1~2次即可,而哺乳動物紅血球醛化2次比醛化1次要好,敏感性高,保存時間也長。不同的雙醛化,其抗原致敏作用有所不同。

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