肉毒毒素的簡介
肉毒梭菌系革蘭氏陽性厭氧菌,易于污染食品,在厭氧條件下產生很強的向神經性毒素即肉毒毒素,能引起以神經麻痹為主要癥狀且病死率甚高的食物中毒(稱肉毒中毒)。肉毒梭菌按所產毒素的抗原特異性分為 A,B,C,D,E,F,G 等七個型,人類肉毒中毒主要由 A,B,E 型所引起,少數由F型引起。肉毒中毒是神經型食物中毒,其癥狀主要是神經系統癥狀,以對稱性顱神經損害的癥狀為特征,如視力模糊、眼瞼下垂、復視、瞳孔散大、語言障礙、吞咽困難、呼吸困難,繼續發展可由于呼吸肌麻痹引起呼吸功能衰竭而死亡。
引起肉毒中毒的食品因飲食習慣、膳食組成和制作工藝的不同而有差別。我國引起中毒的食品大多是家庭自制的發酵食品,如豆瓣醬、豆醬、豆豉,臭豆腐等,有少數發生于各種不新鮮肉、蛋、魚類食品。日本以魚制品引起中毒者較多,美國以家庭自制罐頭和肉乳制品引起中毒者為多,歐洲多見于臘腸、火腿和保藏的肉類。
肉毒毒素檢測是以小白鼠腹腔注射法為標準方法。
1、樣品的處理
液狀檢樣可直接離心,固體或半固體檢樣須加適量(例如等量、倍量或5倍量、10倍量)明膠磷酸鹽緩沖液,浸泡、研碎,然后離心。取上清液進行檢測。
另取一部分上清液,調 PH 值為6.2,每9份加10%胰酶(活力1:250)水溶液1份混勻,經常輕輕攪動,37℃作用60min,進行檢測。
2、檢出試驗
取上述離心上清液及其胰酶激活處理液,分別注射小白鼠2只,每只0.5mL,觀察4天。注射液中若有肉毒毒素存在,小白鼠一般多在注射后24h內發病、死亡,主要癥狀為豎毛、四肢癱軟、呼吸困難、呼吸呈風箱式腰部凹陷宛如峰腰,最終死于呼吸麻痹。如遇小鼠猝死,以致癥狀不明顯時,則可將注射液做適當稀釋,重新試驗。
3、確證試驗
不論上清液或其胰酶激活處理液,凡能致小鼠發病、死亡者,取樣分成3份進行試驗1份加等量多型混合肉毒抗毒診斷血清,混勻,37℃作用30min;1份加等量明膠磷酸鹽緩沖液,混勻,煮沸10min;1份加等量明膠磷酸鹽緩沖液,混勻即可,不做其他處理。3份混合液分別注射小白鼠各2只,每只0.5mL,觀察4天,若注射加診斷血清與煮沸加熱的2份混合液的小白鼠均獲保護存活,而惟有注射未經其他處理的混合液的小白鼠以特有癥狀死亡,則可判定檢樣中有肉毒毒素存在,必要時進行毒力測定及定型試驗。
4、毒力測定
取已判定含有肉毒毒素的檢樣離心上清液用明膠磷酸鹽緩沖液做成50倍、500倍及5000倍的稀釋液,分別注射小白鼠各2只,每只0.5mL,觀察4天。根據動物死亡情況,計算檢樣中所含肉毒毒素的大體毒力(LD/mL或LD/g)。例如,5倍、50倍及500倍稀釋液致動物全部死亡,而注射5000倍稀釋液的動物全部存活,則可大體判定檢樣上清液所含毒素的毒力為1000～10000LD/mL。
5、定型試驗
按毒力測定結果,用明膠磷酸鹽緩沖液將檢樣上清液稀釋至所含毒素的毒力大體在10～1000LD/mL 的范圍,分別與各單型肉毒抗毒診斷血清等量混勻,37℃作用30min,各注射小白鼠2只,每只0.5mL,觀察4天。同時以明膠磷酸鹽緩沖液代替診斷血清,與稀釋毒素液等量混合作為對照,能保護動物免于發病、死亡的診斷血清型即為檢樣所含肉毒毒素的型別。