食品微生物檢測實驗室操作要求

    食品微生物實驗室工作人員，必須有嚴格的無菌觀念，許多試驗要求在無菌條件下進行，主要原因：一是防止試驗操作中人為污染樣品;二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由于操作不當造成個人污染。

　　無菌操作要求

　　1.接種細菌時必須穿工作服、戴工作帽。

　　2.進行接種食品樣品時，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應放在無菌室緩沖間，工作前經紫外線消毒后使用。

　　3.接種食品樣品時，應在進無菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球將手擦干凈。

　　4.進行接種所用的吸管，平皿及培養基等必須經消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼三次后使用。

　　5.從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。

　　6.接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒。

　　7.接種環和針在接種細菌前應經火焰燒灼全部金屬絲，必要時還要燒到環和針與桿的連接處，接種結核菌和烈性菌的接種環應在沸水中煮沸5min，再經火焰燒灼。

　　8.吸管吸取菌液或樣品時，應用相應的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。

　　無菌間使用要求

　　1.無菌間通向外面的窗戶應為雙層玻璃，并要密封，不得隨意打開并設有與無菌間大小相應的緩沖間及推拉門，另設有0.5～0.7m2的小窗，以備進入無菌間后傳遞物品。

　　2.無菌間內應保持清潔，工作后用2%～3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺面，不得存放與實驗無關的物品。

　　3.無菌間使用前后應將門關緊，打開紫外燈，如采用室內懸吊紫外燈消毒時，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時間不少于30min，使用紫外燈，應注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。

　　4.處理和接種食品標本時，進入無菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞。

　　5.在無菌間內如需要安裝空調時，則應有過濾裝置。

　　消毒滅菌要求

　　微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養基、被污染和接種的培養物等，必須經滅菌后方能使用。

　　干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法

　　1.滅菌前準備

　　(1)所有需要滅菌的物品首先應清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應將上面通氣孔打開。

　　(2)裝培養基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。

　　2.裝放

　　(1)干熱滅菌器：裝放物品不可過擠且不能接觸箱的四壁。

　　(2)大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品分別包扎好，直接放入消毒筒內，物品之間不能過擠。

　　3.設備檢查

　　(1)檢查門的開關是否靈活，橡皮圈有無損壞，是否平整。

　　(2)檢查壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位，關好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合，管道有無堵塞。

　　(3)對有自動電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應檢查規定的程序，是否符合于進行滅菌處理的要求。

　　4.滅菌處理

　　(1)干熱滅菌法：

　　此法適應于在干熱情況下，不損壞、不變質、不蒸發的物品、較常用于玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等的滅菌。

　　①器械器皿應清洗后再干烤，以防附著在表面的污物炭化。

　　②滅菌時安放物品不能過擠，不要直接接觸底和箱壁，物品之間留有空隙。

　　③菌時將箱門關緊，接上電源，先將排氣孔打開約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度升至160℃調節指示燈，維持1.5～2h。

　　④滅菌完畢后或溫度升溫過程中，須在60℃以下才能打開箱門。

　　(2)手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應按下列步驟進行：

　　①手提式高壓鍋在主體內加入3L清水，立式高壓鍋加水16L(重復使用時應將水量補足，水變混濁需更換);

　　②手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用);

　　③蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣;置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣(水沸騰后排氣10～15min);

　　④關閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規定要求，并維持規定時間(按滅菌物品性質與有關情況而定);

　　⑤達到規定時間后，對需干燥的物品，立即打開排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復到零時，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復至零，溫度降到60℃以下，再開蓋取物，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。

　　(3)臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進行：

　　①關緊鍋門，打開進氣閥，將蒸氣引入夾層進行預熱，夾層內冷空氣經阻氣器自動排出;

　　②夾層達到預定溫度后，打開鍋室進氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內冷空氣經鍋室阻氣器自動排出;

　　③待鍋室達到規定的壓力與溫度時，調節進氣閥，使保持恒定;

　　④自然或人工降溫至60℃再開門取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破;

　　⑤使用自動程序控制式壓力蒸氣滅菌器，在放好物品關緊門后，應根據物品類別按動相應開關，以便按要求程序自動進行滅菌，滅菌時必須利用附設儀表記錄溫度與時間以備查，操作要求應嚴格按照廠家說明書進行;

　　5.滅菌溫度與時間

　　(1) 干熱滅菌器滅菌溫度160℃，1.5～2h。

　　(2) 壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間

　　間歇滅菌方法

　　1.滅菌方法系：

　　利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質經高壓蒸氣滅菌容易破壞，可用此法滅菌。

　　(1)將欲滅菌物品置于鍋內，蓋上頂蓋，打開排水口，使器內余水排盡。

　　(2)關閉排水口，打開進氣門，根據需要消毒10～20min。

　　(3)滅菌完畢關閉進氣門，取出物品待冷至室溫溫度，放入37℃溫箱過夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可達到滅菌目的。

　　2.血清凝固器使用方法:

　　培養基中含有血清或雞蛋特殊成份時，因高熱會破壞其營養成份，故用低溫，可使血清凝固，又可達到滅菌目的：

　　(1)在使用該法滅菌的血清等分裝時，需嚴格遵守無菌操作，試管、平皿也經滅菌后使用;

　　(2)將培養基按要求使成斜面或高層，加足水后，接上電源，升溫75～90℃一小時后滅菌，放37℃溫箱過夜，再如此滅菌三次。

　　3.煮沸消毒：

　　可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮5～15 min，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5min，加入0.02%甲醛，80℃煮60min均可達到滅菌目的，但選用煮沸消毒的增消劑時，應注意對物品的腐蝕性。