食品檢測中培養基的質量控制

　　摘要：培養基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環節，培養基自身質量的優劣、保存條件、環境是否得當、配置使用的正確與否直接影響到培養基的質量從而影響到檢測結果的準確性、可靠性，可見培養基是檢測工作的基礎自80年代以來，微生物培養基專業在研究開發、制造和應用等領域發展迅速，尤其是干燥培養基以其便利、實用和高效，得到使用者的認可。但國內該行業生產工藝的設備較落后，對產品的分析手段也不完善，成品培養基質量參差不齊，影響了使用效果，因此本文對目前微生物檢測中培養基的購置、制備、貯存和使用過程中的關鍵點，從培養基的配置、水化、滅菌、接種、性能測試等方面應采取的措施進行探討，以提高和完善實驗室中培養基的質控水平。 
　　隨著生物技術的迅速發展，微生物對醫藥衛生、臨床檢驗、實驗動物及食品、化妝品、工農業、環保等眾多領域發揮著越來越重要的作用。由于各類微生物有著不同的營養要求以及對微生物培養的各自工作目的，促進了微生物培養基的研究、生產、使用技術的不斷改進。雖然國家標準GB/T4789.1-4889.31-2003中對檢驗中所用的培養基、配置方法作了具體規定，但在實際的實驗室檢測工作中還存在著許多復雜因素，忽視這些因素很可能給檢測結果帶來偏差，甚至錯誤，從而無法正確評價被測樣品的微生物污染狀況。本文結合在微生物檢測中針對培養基的配置及使用過程中的實踐經驗、操作方法、質量控制等措施談一些觀點和看法，希望有利于微生物檢側工作更好地開展[1]。 
　　1培養基的分類 
　　1.1固體培養基 固體培養基是在培養基中加入凝固劑，有瓊脂、明膠、硅膠等，常用于微生物分離、鑒定、計數和菌種保存等方面，實驗室中常用的有營養瓊脂、麥康凱、TCBS等。 
　　1.2液體培養基 液體培養基中不加任何凝固劑。這種培養基的成分均勻，微生物能充分接觸和利用培養基中的養料，實驗室中常用的有生理鹽水、肉湯培養基、致病菌的各類增菌液。 
　　1.3半固體培養基 半固體培養基是在液體培養基中加入少量凝固劑而呈半固體狀態。可用于觀察細菌的運動、鑒定菌種和測定噬菌體的效價，實驗室中常用的有保存菌種的半固體。 
　　2培養基的購置與驗收 
　　購置：從培養基自身的質量來看，不同生產廠家的產品，甚至同一產家不同批號的產品都會存在差異[2]。依據ISO/IEC17025：2005《檢測和校準實驗室能力的通用要求》，對培養基的供應企業進行評價后選擇合格的供應商，這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證和服務保證能力的企業；企業是否通過了質量管理體系是較為客觀的評價指標。但要求生產企業提供：培養成分名稱及產品編號、批號、使用前的PH值、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書和必要的安全/危害數據等材料[3]。 
　　3培養基的貯存 
　　干粉培養基應保存在陰涼干燥處，避免陽光直射；末開瓶的培養基在室溫下保存3年，開瓶后的干粉培養基易吸潮，應注意防潮并在6個月內用完。定期對儲存中的培養基進行常規檢查，如容器密閉性復查、首次開封日期、內容物的感觀檢查，如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能在使用，液體培養基和平板類的培養基儲存于2℃～8℃的冰箱內。 
　　4培養基的制備 
　　目前實驗室內培養基的配置主要分為干粉培養基和新鮮培養基二類。干粉培養基是將培養基原材料濃縮，噴霧干燥，然后根據要求將干粉原料按一定配比制成各種不同的培養基。干粉培養基在使用時，只需按說明書稱重，加入蒸餾水、分裝、高壓滅菌后即可使用[4]。 
　　實驗室自做的培養基必須準確根據處方，做好培養基的配置記錄，對配方中各成分應該分別添加，注意添加順序，分裝滅菌之前各成分應互溶或完全均勻。 
　　4.1培養基制備用水 應使用電阻率不小于30萬Ω的蒸餾水或與其同質的水，不使用去離子水和自來水，因為去離子水即使經過濾除菌還是可能含有抑制一些微生物生長的物質，自來水中含有有效氯等抗菌物質，培養基加水時應沿著容器壁緩慢加入，可先加入1/3水量，振搖后再加入剩余的2/3水量，并順勢將附著于容器壁的培養基粉末沖下。其次實驗室內的蒸餾水不可保存時間過長，最好3個月內進行更換，以保證蒸餾水內無微生物的污染。 
　　4.2培養基的稱量和用量的計算 
　　4.2.1培養基的稱量 稱量時要用專用的角匙，若稱量多種培養基，每次使用后角匙要清洗，晾干后再進行稱量，避免交叉污染而影響檢測結果。稱量粉末類培養時盡量戴上口罩，防止粉末的吸入，做好檢驗人員的個人防護工作。選擇性的培養基極易吸潮，吸潮后培養基的pH將降低，改變了培養基的性質，所以應選擇濕度較低的房間作為培養室或干粉類的培養基選擇專用房間稱量。 
　　4.2.2培養基用量的計算 按照培養基的用法說明由配方的規定和需要制備的培養基數量精確計量取用，不同批號、不同廠家同一種的培養基用量和配置存在著不同，每一次使用，都要核對用法，重新計算用量。 
　　4.3培養基的復水 復水所用的玻璃容器最好為中性硬質的材料，耐高溫高壓，不銹鋼器具為316L材質經焊縫射線檢測，不使用銅鍋和鐵鍋，防止金屬離子的析出。計量的器具每年要進行校正，合格后才可使用。新使用的玻璃容器要使用0.2%的過氧乙酸浸泡24h，沖洗干凈后才可使用，這樣可防止容器中存有的游離堿性物質，使培養基中的pH值升高[5]。容器大小的選擇：應根據配置的需要大于復水后培養基總體積的二倍以上，防止在加熱溶解時培養基溢出。 
　　5培養基的分裝 
　　根據需要將培養基分裝于不同的三角燒瓶、試管等 
　　5.1基礎培養基 實驗室應常貯有無菌的基礎培養基，以便臨時分裝或配制鑒別培養基等。分裝的量根據使用目的和要求決定，但必須定量分裝，便于應用。一般分裝于三角燒瓶或鹽水瓶內，高壓滅菌后備用。