飼料中維生素A的測定

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

LC1620A 高效液相色譜儀(上海舜宇恒平科學儀器有限公司)；

FA2004 電子分析天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司)；

甲醇(色譜純，美國Tedia)，維生素A 標準品(純度＞95%，阿拉丁試劑)。

1.2 標準溶液的配制

參考GB/T 17817-2010 飼料中維生素A 的測定高效液相色譜法，配制濃度為3.44μg/ml 的標準工作液。

1.3 色譜條件

色譜柱：Shodex C18-100-4D(4.6×150mm)

流動相：甲醇：水(95：5)

流速：1.0ml/min

柱溫：室溫

進樣量：20μl

檢測波長：326nm

2 實驗結果

2.1 精密度

將1.2 中所配制的3.44μg/ml 標準溶液，在1.3 描述的高效液相色譜條件下進樣，重復進樣五次，結果如表1 所示RSD 均在1.0%以內。

表1 精密度實驗結果

圖1 標準品譜圖

2.2 標準曲線

將1.2 中所配制的標準待測溶液逐級稀釋為1.29μg/ml、0.86μg/ml、0.43μg/ml、0.07μg/ml 不同濃度，在1.3 描述的高效液相色譜條件下由低濃度開始進樣，所得標準曲線結果如下：

2.3 實際樣品測定

參考GB/T 17817-2010 第一法皂化提取法對飼料樣品進行處理，具體步驟如下：

1、皂化：稱取試樣5g，置于250ml圓底燒瓶中，加入50ml的L-抗壞血酸乙醇溶液(5g/L)，使試樣完全分散、浸濕，加10ml氫氧化鉀溶液(500g/L)，搖勻。置于沸水浴中回流30min，不時振蕩。皂化結束后，分別用5ml無水乙醇、5ml水自冷凝管頂端沖洗，取出燒瓶冷卻至40℃；

2、提取：定量轉移全部皂化液于盛有100ml二氯甲烷的500ml分液漏斗中，用50ml水分3次沖洗圓底燒瓶并入分液漏斗，加蓋、放氣、隨后混合，激烈振蕩2min，靜置、分層。同樣操作三次，合并二氯甲烷相。用水100mL 洗滌二氯甲烷提取液至中性。后用無水硫酸鈉脫水，轉移至250ml棕色容量瓶中，加100mgBHT 溶解，用二氯甲烷定容至刻度。

3、濃縮：從二氯甲烷提取液中分取10ml，氮吹濃縮至近干。殘渣以甲醇溶解，定容至1ml。用甲醇稀釋100倍，經0.45μm濾膜過濾，作為待測樣品溶液。

待測溶液在1.3 描述的高效液相色譜條件下進樣，所得結果如下：

按稱量樣品量及稀釋倍數計算得實際樣品含量為2.08×10³mg/kg。

圖2 實際樣品譜圖

3 結論

采用LC1620A 高效液相色譜儀，參考GB/T 17817-2010 的方法對維生素A 進行分析，分析精密度與線性關系結果良好，并對實際樣品進行分析，分離檢出良好，符合國家標準的分析需要。