可殺滅包括芽胞在內的所有微生物，是滅菌效果最好、應用最廣的滅菌方法。方法是將需滅菌的物品放在高壓鍋（autoclave）內，加熱時蒸汽不外溢，高壓鍋內溫度隨著蒸汽壓的增加而升高。在103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸汽壓下，溫度達到121.3℃，維持15～20分鐘。適用于普通培養基、生理鹽水、手術器械、玻璃容器及注射器、敷料等物品的滅菌。
高壓蒸汽滅菌器分類有下排式壓力蒸汽滅菌器和預真空壓力蒸汽滅菌器兩大類。
