| 實驗步驟 | 1. 從 1.2 mol/L 蔗糖/勻漿液界面處分離富含高爾基體的部分至終體積為 5 ml 左右 。
2. 分別加入 3 mg 的粗制曲霉 X-A型 α-淀粉酶和來自大麥芽的 3-A型 α-淀粉酶。
3. 將混合物在 4℃ 保溫 45 分鐘。
4. 保溫結束后用尖端內徑約 1 mm 的巴斯德吸管將懸液反復吹吸 40 次完成解除堆積的過程 。
5. 準備電泳介質(Chamber 緩沖液)
Chamber 緩沖液:
10 mmol/L 二乙醇胺
10 mmol/L 冰酸酸
5 mmol/L 葡萄糖
0.25 mmol/L 蔗糖
0.5 mmoI/L MgCl2
6. 電泳中采用如下條件(除非廠家另有推薦):167 mA ( 恒流),131±10% V/cm,緩沖液流速為 2.75 ml 每分部每小時,樣品注入速度為 3.5 ml/小時,溫度為 6℃,采用連續自由流動電泳裝置(如 VAP 21,Weber GmbH, Munich, Germany )。
7. 離心收集得到的分部,例如在微量離心機中離心 2 分鐘,然后重懸并用于分析。 展開 |
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