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  • 發布時間:2019-04-04 11:07 原文鏈接: 高爾基體的鑒定實驗

    用制備性的自由流動電泳對高爾基體進行亞分部

    實驗材料

    高爾基體

    試劑、試劑盒

    Chamber 緩沖液

    實驗步驟

    1. 從 1.2 mol/L 蔗糖/勻漿液界面處分離富含高爾基體的部分至終體積為 5 ml 左右 。

    2. 分別加入 3 mg 的粗制曲霉 X-A型 α-淀粉酶和來自大麥芽的 3-A型 α-淀粉酶。

    3. 將混合物在 4℃ 保溫 45 分鐘。

    4. 保溫結束后用尖端內徑約 1 mm 的巴斯德吸管將懸液反復吹吸 40 次完成解除堆積的過程 。

    5. 準備電泳介質(Chamber 緩沖液)

    Chamber 緩沖液:

    10 mmol/L 二乙醇胺

    10 mmol/L 冰酸酸

    5 mmol/L 葡萄糖

    0.25 mmol/L 蔗糖

    0.5 mmoI/L MgCl2

    6. 電泳中采用如下條件(除非廠家另有推薦):167 mA ( 恒流),131±10% V/cm,緩沖液流速為 2.75 ml 每分部每小時,樣品注入速度為 3.5 ml/小時,溫度為 6℃,采用連續自由流動電泳裝置(如 VAP 21,Weber GmbH, Munich, Germany )。

    7. 離心收集得到的分部,例如在微量離心機中離心 2 分鐘,然后重懸并用于分析。

    展開


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