高效、準確測定大批量溶出度樣品

目前，測定固體制劑的多條溶出曲線愈發受到關注，其在藥品研發、質控與內在質量評價上已發揮出舉足輕重的作用。而如何實現大批量溶出度樣品的高效、準確、快捷的測定，一直困擾著分析人員。本人在多年工作經驗基礎上進行了梳理與歸納，提出以下思路與見解，供大家參考。

目前，測定固體制劑的多條溶出曲線愈發受到關注，溶出度在藥品研發、質控與內在質量評價上已發揮出舉足輕重的作用。而如何實現大批量溶出度樣品的高效、準確、快捷的測定，一直困擾著分析人員。解決這一問題有以下幾個方法。

采用錯時投樣

對于片劑/槳板法的測定，為使手動取樣時不至“手忙腳亂”，采取間隔固定時間（如30s）的投樣方式，這樣便可做到平行操作、從容不迫了。

手動抽取樣品

建議采用“1個濾頭/1個取樣針筒方式”進行多樣品抽取。第1份樣品抽取10~20ml后，過濾使濾膜吸附飽和，并將濾液沿溶出杯壁緩慢注回，再抽取所需體積（如HPLC法只需1~2ml）即可，其后所有樣品無需再棄去初濾液，直接收集。至于對樣品間污染的擔憂，由于針筒內殘余量很少，故誤差完全可忽略。強烈建議：不要采用“分別濾頭/分別針筒方式”，既浪費人力和物力，又會給試驗帶來較大誤差。

盡可能采用HPLC測定

現今，由于國產輔料質量參差不齊，在紫外處有吸收的較多，其中薄膜衣/腸溶衣/糖衣/膠囊殼更為嚴重，導致紫外法測定時經常出現溶出度均值高出含量10%~30%的情況。同時，由于原研參比制劑的輔料一般無法獲得，故輔料對測定結果的干擾更將無法評價。

因此這里建議采用HPLC測定法。因為絕大部分輔料都是惰性的，在反相色譜柱上不會出峰，即便出峰保留時間也較短，故皆不會干擾主成分測定。另外，由于HPLC法線性范圍寬， 樣品均可直接進樣測定，省略了紫外測定吸收度值需在0.20~0.80以及樣品稀釋的繁瑣步驟，大大提高了工作效率。

如今，一些自動溶出儀收集器已可直接接收于液相小瓶內，且由于附帶了加墊片的蓋兒，可防止采集過程中小瓶內液體揮發，非常方便。

如采用紫外法測定，為盡可能排除干擾，建議采用雙波長相減法（最大吸收波長與遠端無吸收波長）。但如樣品是手動操作測定，這將極其繁瑣。而光纖溶出儀便通過采用雙波長相減法，將光纖探頭直接插入溶出杯中即時測定，值得肯定與推薦。但該法使用的前提是：輔料干擾呈一“平行線”。

為了提高HPLC的測定效率，以下是幾項建議：

樣品處理

由于HPLC法測定需樣品量少，每一時間點的取樣量1~2ml即可，因此，對于小規格制劑（不超過10mg），建議樣品溶液經手動取出后無需過濾，直接置于液相小瓶中，放置0.5h即可進樣測定。因為在取樣點位置處，吸取這么小體積攜帶出輔料的可能性極小，即便有少量存在，靜置后使其沉淀，也不會影響到測定，更不會堵塞色譜柱。這樣，還可省略去溶出量累積計算的繁瑣以及過濾時濾膜吸附的擔憂，起到事半功倍的效果。

該法尤適用于采用自動取樣裝置時，管路與濾膜有吸附樣品的情況，此類多為小規格/難溶制劑，主成分進行了微粉化處理，比表面能較大，故易出現該情形。

調節流動相，縮短保留時間

為加快測定，可提高已驗證、并確定的流動相中的有機相比例。這樣，雖然有雜質與主成分未能分離的問題，但考慮到樣品已被稀釋900~1000倍（溶出介質體積通常為該體積），在此條件下，存在的微量雜質響應值已微乎其微，即便有所體現，其影響對于溶出結果而言亦在誤差范圍之內，可忽略不計。

升高柱溫、縮短保留時間

升高柱溫至40~50℃。一般的反相色譜柱最高承受溫度可達80℃，在60℃以下試驗毫無問題。

加大流速、縮短保留時間

流速可根據柱壓的限制提高至1.5~2.0ml/min，以加快測定進程。

調整進樣量

對于小規格制劑，進樣量可根據對照品溶液的精密度予以靈活調節，只要儀器功能許可，100~500μl是完全可以的。需強調的是：建議采用溶出量為標示量10%濃度的對照品溶液進行精密度驗證，以確保測定低濃度樣品時的準確性。

以上多項措施，都是由于峰面積小，通過縮短保留時間使色譜峰“變細變尖（銳）”，或通過加大進樣量來提高檢測精密度。

改變檢測波長

對于大規格制劑，在幾近全部溶出時，由于濃度過大，會出現色譜柱超載或檢測器超載而導致峰形不佳的情形，此時可通過改變波長（或降低進樣量至5μl）使峰面積變小，從而令色譜峰精密度滿足要求。

使用超高速液相

如采用超高速液相測定，效果更好，但由于色譜柱粒徑較小，樣品液若不過濾，恐堵塞色譜柱，建議試驗時驗證后予以酌情考慮。

液相軟件編程

對于大批量樣品的數據處理，一定要充分利用儀器自帶的軟件功能，絕不建議將每一個峰面積輸入Excel軟件計算這種費時費力的方式。

現今市場上的主流品牌色譜儀皆已具有數據批量處理功能和打印功能（多張圖譜結果打印在一張紙上），將這些功能掌握后一次性編輯好模板，便可大大提高工作效率。本人曾在5min內完成50個樣品的數據處理（得到溶出量），每一溶出量數據直接從軟件中拷貝出，粘貼至Excel軟件中，畫出溶出曲線圖。 “工欲善其事、必先利其器”，充分掌握軟件功能至關重要。