高效液相色譜中固定相可分為正向色譜和反向色譜
1 正相色譜法
采用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相)
流動相為相對非極性的疏水性溶劑(烷烴類如正已烷、環已烷）
常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時間
常用于分離中等極性和極性較強的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）
2 反相色譜法
一般用非極性固定相（如C18、C8）
流動相為水或緩沖液
常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間
適用于分離非極性和極性較弱的化合物
RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛
據統計，它占整個HPLC應用的80%左右