雙氰胺又名二氰二氨,縮寫DICY或DCD。是氰胺的二聚體,也是胍的氰基衍生物。白色結晶粉末,可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺,幾乎不溶于醚和苯。干燥時穩定。雙氰胺化肥,雙氰胺復合肥料可控制硝化菌的活動,使氮肥在土壤中的轉化速度得到調節,減少氮的損失,提高肥料的使用效率。農民普遍會在牧場使用雙氰胺,目的是防止硝酸鹽等對人體有害的肥料副產品流入河流或湖泊。新西蘭的奶牛養殖是采取放養的方式,如果草木干旱,奶農往往會使用一些肥料增強草木的抗旱性以及肥力,這就造成了污染。而由于新西蘭國內注重環保,因此使用雙氰胺對草木中的有害物質進行中和,這就導致了殘留的藥品流入奶牛體內,造成奶品的污染。
2013年1月25日,新西蘭牛奶中發現了有害物質—雙氰胺。雖然國際標準未對食品中的雙氰胺限量,但高劑量的雙氰胺對人體是有毒的。
奶粉中雙氰胺的LCMSMS檢測的難點在于:首先雙氰胺本身的分子量很小,極性很大,一般的C18柱保留不住,其次嬰幼兒奶粉的基質非常復雜,含有大量糖類和蛋白質,必須有合適的前處理方法以獲得更好的凈化效果。本實驗選用Thermo Scientific Syncronis HILIC色譜柱配合Hypercarb凈化柱,建立了雙氰胺LCMSMS高效液相色譜串聯質譜法測定奶粉中的雙氰胺Application Notes CM0095周 亮賽默飛世爾科技(中國)有限公司的檢測方法,結果顯示該方法具有靈敏度高,重現性較好等特點。
2.實驗部分
2.1儀器與試劑:TSQ Quantum Ultra三重四極桿串聯質譜儀(賽默飛世爾科技Thermo Fisher Scientific公司),配置有電噴霧電離源(ESI);Dionex Ultimate 3000 RSLC超高壓液相色譜標準品:雙氰胺純度大于98%,內標雙氰胺-15N4純度為95%。用乙腈溶解并配制成1.0 mg/mL標準儲備液,再根據需要稀釋成適當含量的混合標準工作液。其他試劑均為HPLC色譜純。

2.2儀器方法:2.2.1液相條件:色譜柱:Syncronis HILIC,100mm× 2.1mm,5μm;梯度洗脫程序見表1,其中A為0.5mM NH4Ac(pH=4.0)水溶液,B為乙腈。進樣量10μL.
2.2.2質譜條件:電噴霧電離源(ESI),正離子模式;選擇反應監控(SRM)掃描模式,噴霧電壓:3000V;氣化器溫度350°C,離子傳輸管溫度:350°C;氮氣作為鞘氣和輔助氣,其中鞘氣為30arb,輔助氣為8arb,氬氣用作碰撞氣,碰撞壓力為1.5mTorr;選擇反應監測(SRM),離子對見表2。

3結果分析
3.1靈敏度:經實驗測定,雙氰胺的LOD為0.25ng.mL-1,信噪比為20,提取離子流圖見圖1。
3.2線性范圍
采用上述儀器方法進行測定,雙氰胺在0.5ng.mL-1-100ng.mL-1呈現良好的線性相關性,線性相關系數為0.9998,濃度水平分別為:0.5ng.mL-1、1ng.mL-1、5ng.mL-1、10 ng.mL-1、50ng.mL-1、100ng.mL-1,內標雙氰胺-15N4濃度為5ng.mL-1,線性方程見圖2。

3.3精密度
對1ng.mL-1的雙氰胺,采用上述儀器方法,連續進樣7針,計算RSD值。結果為1.19%,離子流圖如圖3。

3.4 奶粉樣品分析
取某市售嬰幼兒奶粉試樣,進行添加回收實驗。奶粉的前處理方法如下:稱奶粉基質樣品2.000g,加10mL 1%的甲酸/水提取液,渦旋震蕩提取5min,超聲萃取10min;冷凍離心機6000R/min,離心10min,取上清液5mL到小離心管中,14000R/min離心10min,上清液全部過凈化柱(3cc,200mg/Hypercarb),控制流速1mL/min,用10mL超純水清洗柱子;用甲醇/乙腈(4/6)洗脫,接取洗脫液氮氣吹干(40°C),用1mL(乙腈/水,9:1)定容,0.22微米有機濾膜過濾,上機檢測。結果表明,空白基質在雙氰胺及內標雙氰胺-15N4的出峰位置沒有干擾,添加5ng.mL-1的色譜圖如圖4,該圖中上方為基質添加,下方為基質空白。

結論:TSQ Quantum Ultra三重四極桿液質聯用系統檢測奶粉中雙氰胺具有靈敏度高、特異性好的優點,檢測定量限可以做到0.25ng.mL-1。并且該方法具有良好的線性范圍與精密度,在0.5ng.mL-1-100ng.mL-1的線性相關系數為0.9998,重復進樣7針1ng.mL-1的雙氰胺的RSD值為1.19%。使用Hypercarb凈化柱能很好的處理奶粉樣品,空白基質沒有干擾,證明該方法檢測雙氰胺具有很好的適用性