介紹了用高效液相色譜法分析大豆油中脂肪酸組成的方法皂化后的油不需要直接提取,直接形成脂肪酸苯乙酮,經梯度浸出大大縮短了分離時間該方法可直接應用于生物樣品。
一、儀器和試劑
高效液相色譜儀,配紫外檢 測器。
擦櫚酸> 99%,
花生酸 > 99%,
硬 脂 酸> 99.5%,
亞 油 酸> 99%,
亞 麻 酸> 99%,
油酸> 99,
8-溴乙酰苯酚(CP),使用前與正戊烷重結晶。
三乙胺(CC P)在使用前經精餾純化其他試劑均為r級。
二、標準樣的制備
將棕櫚酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、0.015g、0.005g硬脂酸和0.001g花生酸稱重為10ml的N-二氧六環。取混合物0.3ml,用氮氣干燥濃縮,以酚酞為指示劑,用0.1mol/l KOH乙醇溶液中和,在N:中再次吹掃酯化。
三、樣品的前處理
加入0.05ml大豆油,加入5ml0.5mol/LKOH乙醇溶液回流30min取冷卻液0.3ml以酚酞為指示劑,用鹽酸乙醇(4:1v/V)溶液中和至終點氮氣吹干酯化。
四、酯化
標準樣品和大豆油樣品分別加入0.2ml∞單溴苯乙酮丙酮溶液(12 mg/ml)和0.2ml羊乙胺丙酮溶液(10 mg/ml),回流10 min后直接測定脂肪酸∞-溴苯乙酮酯混合物。
五、高效液相色譜儀分析條件
ODS柱:4.6×150mm
柱溫:室溫
波長:254nm
流動相:甲醇-水-高氯酸(85-14.75-0.25)為起始洗脫液13分鐘后,洗脫液變為100%甲醇,直到分離結束。
流速:2mL/min。
譜圖用峰高法定量。