高效液相色譜定性方法

與氣相色譜相比，高效液相色譜定性的難度更大。HPLC過程中影響待測組分遷移的因素較多，同一組分在不同色譜條件下的保留值可能相差很大。即便在相同的操作條件下，同一組分在不同色譜柱上的保留值也可能有很大差別。因此，在高效液相色譜分析過程中，對定性分析方法提出了更高的要求。

（1）利用檢測器的選擇性進行定性  將經色譜柱分離后的樣品引入并聯或串聯的幾種不同檢測器，根據它們不同的檢測性能，視其出峰情況可以初步判別出未知化合物的具體類別。
（2）反相色譜中的“a、C”指數定性  在以硅膠為固定相的反相色譜中，待測組分保留值與流動相組成關系式中的系數能夠反映待測組分的結構特征，因此可用于待測組分的輔助定性。
反相色譜中有機調節劑的濃度c與待測組分的分配比之間滿足對數線性關系，可表示為：
                          ln k = a+Cc  （10.8）
      式中，a、C分別為與流動相性質、固定相性質有關的常數。
      基于式（10.8），盧佩章等列出了460種化合物在C18柱上不同條件下的a、C指數，并提出可不同柱系統、不同沖洗劑濃度組成時，a、C指數之間的換算方法。在相同的色譜條件下，如果樣品中某一組分的a、C指數與某已知標樣相同，即可認定兩者為同一種化合物。
此外，待測組分的分配比k作為一種結構型物性參量，其對數值與同系物碳數n之間存在良好的線性關系。
                           ln k = a+bm  （10.9）
      式中，a、b為常數。對于包含同系物組分的樣品，如果已知部分同系物在色譜圖中的位置，此時，可以根據碳數規律來推測其他同系物組分。
      近年來，一系列推測保留值變化與待測組分分子結構關系的軟件被發展，可用于輔助定性，但精度仍十分有限。高效液相色譜定性的方法仍有待于改進。