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  • 發布時間:2020-07-06 20:00 原文鏈接: 高效液相色譜的日常維修保養規則

      鬼峰產生的緣由是多種多樣的,依據自己的經歷以及文獻報道,將緣由歸結為以下幾個方面:

      1、活動相、樣品稀釋液、儀器或是容器中存在雜質,當梯度開端時由于有機相比例不高,洗脫才能不強,雜質在色譜柱柱頭富集,隨著活動相比例變化,洗脫才能加強,富集的雜質被洗脫,從而構成鬼峰。

      2、活動相脫氣不完整。空氣在有機相和水中的溶解度不同,當水和有機相混合時,氣泡就產生了

      3、操作問題

      一

      1、試劑問題

      a) 有機溶劑

      甲醇制備工藝相對乙腈來說較為簡單,雜質含量也較少。但是由于甲醇紫外吸收范圍比乙腈廣,所以當運用紫外檢測器時,特別是波長較低時,盡量運用乙腈作為有機相,用甲醇的話漂移太大。而用作梯度色譜的乙腈質量請求較高,普通用進口梯度色譜專用乙腈可以很好的減少鬼峰的呈現。

      b) 水

      很多單位用自制蒸餾水作為水相,但是結果并不是很好。緣由就是一些低沸點的有機雜質并不可以經過蒸餾除掉。有條件的盡量用HPLC級的純水,沒有條件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水替代,但是假如色譜條件比擬嚴厲也是有可能出問題的。

      c) 其它試劑

      緩沖鹽、TFA、EDTA等試劑也會對活動相形成很大的影響,盡量用純度高的試劑配制活動相。

      2、儀器問題

      a) 液相的活動相管路被污染。

      長時間的運用含水量較高的活動相(特別是參加緩沖鹽的),細菌就容易在管路中滋生,細菌的代謝產物或是細胞碎片能形成鬼峰。

      b) 保送泵毛病,形成系統壓力不穩,從而產生鬼峰。

      c) 單向閥梗塞,形成系統壓力不穩,從而產生鬼峰。早期島津的液相單向閥貌似不能用純乙腈作為活動相,如今應該曾經得到改良。

      二

      1、 在線脫氣機脫氣不完整。

      2、 兩種活動相的有機相比例相差太大。例如A為100%水,B為100%乙腈。在梯度條件允許的狀況下盡量減少兩中活動相之間的差距,降低空氣在兩中活動相中溶解度的差別,從而減少氣泡的產生。

      3、 活動相配置好后預先超聲脫氣。

      三

      1、活動相配置過程中遭到污染

      a) 盛放活動相的容器或是量具遭到污染。

      這種污染可能來自于洗濯劑、鉻酸洗液或是其他實驗人員用完后的殘留雜質。活動相容器的清洗普通用潔凈的水+有機溶劑涮洗就行,過多的清洗步驟反而可能形成二次污染。有時活動相容器的塑料蓋碎片都有可能是雜質的來源。

      b) pH計。

      很多pH計以聚碳酸酯作為外殼,但是聚碳酸酯是能夠溶于有機溶劑的,所以盡量運用玻璃pH計來丈量活動相的pH。

      c) 濾膜。

      劣質的或者型號錯誤的濾膜常常是鬼峰呈現的緣由。

      d) 放置時間過長。

      活動相在空氣中暴露時間過長,就可能吸收空氣中的有機雜質,有時活動相中的添加劑,例如TFA,時間長了會氧化從而產生雜質。

      2、儀器樣品稀釋液與活動相極性或者pH相差太大。

      這也是招致鬼峰的緣由之一,這種問題很有可能招致樣品分為兩個不同的階段出峰,從而產生雙峰或者多峰。

      文章鏈接:儀器設備網 https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-896.html


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