高效液相色譜柱柱效測定

一、實驗目的
1．了解高效液相色譜儀的基本結構和工作原理
2．學習高效液相色譜儀的使用
3．學習、掌握液相色譜柱柱效測定方法
二、基本原理
    高效液相色譜法是以液體作為流動相的一種色譜分析法，它亦是根據不同組分在流動相和固定相之間的分配系數的差異來對混合物進行分離的。氣相色譜中評價色譜柱柱效的方法及計算理論塔板數的公式同樣適合于高效液相色譜，即：
式中：tR為組分的保留時間
Y1/2為色譜峰的半峰寬度
Y為色譜峰的峰底寬度
三、儀器和試劑
1．KLC321型高效液相色譜儀（紫外檢測器）
2．FJ-2000色譜工作站
3．25μl微量進樣器
4．超聲波清洗器
5．試劑：苯、萘、聯苯、甲醇均為分析純；純水為重蒸的去離子水。
    配制成含苯、萘、聯苯各10μl/ml 的甲醇溶液。
四、實驗條件
1．色譜柱  長15cm，內徑 3mm，裝填10mm的C-18烷基鍵合固定相
2．流動相  甲醇:水（85:15），流量0.8ml/min
3．紫外光度檢測器  波長254nm，靈敏度0.08
4．進樣量  5μl
五、實驗步驟
1．將配制好的流動相置于超聲波清洗器上脫氣約30min。
    2．根據實驗條件，按儀器操作步驟將儀器調節至進樣狀態，待儀器流路及電路系統達到平衡，色譜工作站之“采樣系統”基線平直時，即可進樣。
    3．吸取5μl苯、萘、聯苯的甲醇溶液進樣，并用色譜工作站記錄色譜數據，同時記錄色譜數據文件名。
    4．用色譜工作站之“數據處理”系統處理數據文件。
六、數據記錄及處理
1．記錄實驗條件。
（1）色譜柱與固定相
（2）流動相及其流量、柱前壓
（3）檢測器及其靈敏度
（4）進樣量
2．記錄色譜峰的保留時間tR和相應色譜峰的半峰寬Y1/2。
3．分別計算苯、萘、聯苯在該色譜柱上的理論塔板數n。
七、思考題
1．由本實驗計算出的各組分理論塔板數說明什么問題？
2．紫外光度檢測器是否適用于檢測所有有機化合物，為什么？