高效液相色譜柱色譜條件篩選過程中應遵循哪些原則

高效液相色譜柱色譜條件篩選過程中應遵循哪些原則

色譜定量分析是根據組分檢測響應訊號的大小，定量確定試樣中各個組分的相對含量。其依據是：每個組分的量(重量或體積)與色譜檢測器產生的檢測響應值(峰高或峰面積)成正比。具體到特定方法，主要有下列方法：
1.歸一化法
當樣品中所有組分能全部流出色譜柱，并在檢測器上都能產生相應信號（得到色譜峰）時，常采用歸一化法。
Ci = mi/m×100％ = fi?Ai /Σ fi?Ai ×100％
* 優點：簡單方便， 不受進樣量及操作條件波動的影響
* 缺點：所有組分都必須出峰， 每個組分都必須有校正因子

2.外標法（又稱標準曲線法）
配制已知濃度的標準樣品進行色譜分析，測量各組分的峰面積或峰高，作峰面積(或峰高)和濃度的標準曲線，然后在與標準樣品分析相同操作條件下，進入相同量(一般為體積)的未知樣品，測得被分析組分的峰面積（或峰高），在標準曲線上即可查得相應的濃度。
在工廠的日常控制分析中大多數采用這種方法，分析結果的準確性主要取決于進樣量的重復性和操作條件的穩定性。
Ci = mi/m×100％ = fiAi/m×100％
* 校正：標準曲線、兩點法、單點法

* 優點：簡便、無需所有組分都出峰（校正因子），經常用于幾個組分的分析
* 缺點：操作條件波動的影響較大,進樣量影響大

3.內標法
由于吸附或化學反應等原因，色譜柱不能使所有的組分都流出來，或者各組分都能流出，但檢測器不能對所有組分都給出相應的色譜峰，或者有的樣品含量過大（得不到完整的峰），或者過小，或者只要求定量分析復雜樣品中幾個組分，均可采用內標法。
過程：在總量為m樣品中如入質量為mS的內標物S，然后根據被測物和內標物的重量和在色譜圖上相應的峰面積比求出某組分i,的含量
mi/ms = fiAi / fsAs
Ci = mi/m ×100％

= fiAi ms / fsAs m×100％

* 優點：不需所有組分都出峰（校正因子），操作條件和進樣量基本無影響
* 缺點：內標物難找－－穩定無反應、結構性能，相似、保留時間內插并完全分離
* 注意：內標法比較適用于低含量組分的分析， 一般選作內標物的物質，最好在樣品中不存在，其保留值在所有組分保留值的中間，加入內標物的含量和待測組分含量不應相差很大。

4.疊加法（內加法）

內加法適用于較特殊的情況：圖譜上沒有適當位置可插入內標峰，或因各種條件限制無合適的內標物時。
此時可先以樣品出一張圖，再在樣品中加入一定量被測組分后再進樣，看峰面積增加了多少，由此比例來求出原始含量。