高效液相色譜柱的選擇

怎樣選擇色譜柱

現代高效液相色譜中，分離效果好壞的一個重要指標是色譜填的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，因此，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。

一. 硅膠基質填料

1·正相色譜

正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其他具有極性官能團胺基團，如(NH2，APS)和氰基團(CN，CPS)的鍵合相填料。

由于硅膠表面的硅輕基(SiOH)或其他極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。

正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如:正己烷(Hexane)、氯仿(Choroform)、二氯甲烷 (Methylene Cloride)等。

2，反相色譜

反相色譜用的填料常是以硅膠為基質，表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。

反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖掖與甲醇、乙情等的混合物。

樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份最先被沖洗出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。

常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H，(Phenyl)等。

二·聚合物填料

聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸醋等，其主要優點是在pH值為1一14均可使用。

相對于硅膠基質的C18填料，這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。

現有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料，色譜柱柱效較低。