一、液相色譜的分離原理
當流動相中攜帶混合物經過固定相時,其與固定相發生相互作用,由于混合物中各組分在性質和結構上的差異,與固定相之間產生作用的大小,強弱不同,隨著流動相的移動,混合物在兩相間經過反復多次的分配平衡,使得各組分被固定相保留的時間不同,從而按一定次序由固定相中流出。

二、定性
1、利用已知標準樣品定性
①利用保留值定性
利用標準樣品對未知化合物定性是最常用的液相色譜定性方法之一。由于每一種化合物在相同的色譜條件下,其保留值具有特征性,因此可以利用保留值進行定性。
②利用加入法定性
將標準樣品加入到試樣中,觀察各組分色譜峰的相對變化(看峰面積是否變大)
2、與其他分析儀器連用
包括GC-MS、LC-MS、HPLC-DAD等
3、雙檢測器定性
同一種檢測器對不同種類的化合物的響應值是不一樣的,相反,不同的檢測器對同一種化合物的響應也是不同的。所以當某一被測化合物同時被兩種或兩種以上檢測器檢測時,兩個或幾個檢測器對被測化合物的檢測靈敏度比值是與被測化合物的性質密切相關的,可以用來對被測化合物進行定性分析,這就是雙檢測器定性體系的基本原理。
三、定量
1、歸一化法
歸一化法
要求試樣中所有組分都能分離并有響應。由于液相色譜所用檢測器為選擇性檢測器,對很多組分沒有響應,因此液相色譜法較少使用歸一化法。
2、外表法
也叫標準曲線法,外表法是以待測組分純品配置標準試樣和待測試樣同時作色譜分析來進行比較而定量的,可分為標準曲線法和直接比較法。
特點:操作簡單、計算方便,結果的準確度主要取決于進樣量的重現性和操作條件的穩定性。
3、內標法
內標法是比較精確的一種定量方法。它是將已知量的參比物加到已知量的試樣中,那么試樣中參比物的濃度為已知;在進行色譜測定后,待測組分峰面積和參比物峰面積之比應該等于待測組分的質量與參比物質量之比,求出待測組分的質量,進而求出待測組分的含量。
內標法要求:
1、試樣中不含有該物質。
2、與被測組分性質比較接近。
3、不與試樣發生化學反應。
4、出峰位置應在被測組分附近。
特點:
1、內標法的準確性較高,操作條件和進樣量的稍許變動對定量結果的影響不大。
2、每個試樣的分析都要進行兩次稱量,不適合大批量試樣的快速分析。
3、要將內標法中的試樣取樣量和內標物加入量固定。