以葡萄籽提取物為原料,以AB8大孔樹脂為原料吸附純化,不同濃度乙醇梯度洗脫,真空干燥洗脫液,采用高效液相色譜儀對分級產物進行定性、定量分析。
1. 液相色譜條件
流動相:A為2%冰醋酸;B為乙腈:水:冰醋酸80:19.6:0.4
檢測波長:280 nm;
流速:1.0 mL/min;
色譜柱:反相 C18 柱;
2. 對照品測定
準確稱取約50mg原花青素標準物,放入10mL棕色容量瓶中,加入50%乙醇,將超聲波溶液溶解至室溫,使體積恒定,搖勻,用5mg/mL原氰配制對照液。采用高效液相色譜法(hplc)對0.45微米濾紙和10微米針劑后的樣品進行分析。
3.樣品制備
將預處理后的ab-8大孔吸附樹脂加載到色譜柱上.以合適的流速將已知濃度的原花青素樣品溶液加入柱內,分批收集出水,用香草醛-硫酸法測定濃度。當出水濃度達到樣品溶液濃度的1/10時,停止樣品,用4倍于柱床體積(bv)的去離子水以2 bv/h的流速沖洗柱,沖洗后,用體積分數分別為20%、30%、40%、50%和60%的乙醇對原花青素進行梯度洗脫,洗脫流速為2bv/h,各為4bv/h,分批收集出水,真空干燥得到不同濃度的產品。乙醇洗脫條件。
4.樣品檢測及含量測定
用不同濃度的乙醇洗脫(20%,30%,40%,50%,60%)精確稱量約50mg成品,加入10ml棕色容量瓶中,加入50%乙醇,超聲溶解并冷卻至室溫,定容,振蕩,通過0.45進行高效液相色譜分析。通過原花青素的標準光譜測定不同濃度的乙醇洗脫液中的低聚物和低聚物的存在。
5.含量測定
根據原花青素的標準光譜和高效液相色譜分析結果,測定了不同濃度乙醇洗脫液中opc的含量。