高效液相色譜法(HPLC)是目前應用廣泛的分離、分析、純化有機化合物(包括能通過化學反應轉變為有機化合物的無機物)的有效方法之一。 在已知的有機化合物中,約有80%能用高效液相色譜法分離、分析,而且由于此法條件溫和,不破壞樣品,因此特別適合高沸點、難氣化揮發、熱穩定性差的有機 化合物和生命物質。HPLC系統一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數據記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關鍵部位。有的儀器還有 梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、與柱或保護住、柱溫控制器等,現代HPLC儀還有微機控制系統,進行自動化儀器控制和數據處理。制備型HPLC儀 還備有自動餾分收集裝置。
一、輸液泵1.泵的構造和性能輸液泵是HPLC系統中最重要的部件之一。泵的性能好壞直接影響到整個質量和分析結果的可靠性。輸 液泵應具備如下性能:①流量穩定,其RSD應小于0.5%,這關系到定性定量的準確性;②流量范圍寬,分析型應在0.1~10ml/min范圍內連續調, 制備型應能達到100ml/min;③輸出壓力高,一般應能達到150~300KG/CM2:④液缸容積小;⑤密封性能好,耐腐蝕。泵的種類很多,按輸液 性質可分為恒壓泵和恒流泵。恒流泵按結構又可分為螺旋注射泵、柱塞往復泵和隔往復泵。恒壓泵受柱陰影響,流量不穩定;螺旋泵缸體太大,這兩種泵己被淘汰目 前應用最多的是柱塞往復泵。柱塞往復泵的液缸容積小,可至0.1ml,因此易于清洗和更換流動相,特別適合于再循環和梯度洗脫;改變電機轉速能方便地調節 流量,流量不受柱壓影響;泵壓可達400KG/CM2。ADW主要缺點是輸出的脈沖性較大,現多彩采用雙泵系統來克服。雙泵按連接方式可分為并聯式和串聯 式,一般說來并聯泵的流量重現性較好(RSD為0.1%左右,串聯泵為0.2~0.3%),但出現故障的機會較多(因多了單向閥),價格也較貴。