高效液相色譜和氣相色譜法(包括測定方法和計算方法)的定性和定量分析是相同的。定性分析采用純物質控制的色譜鑒別方法,非色譜鑒別方法結合化學分析或其他儀器分析方法采集組分;定量分析采用峰高或峰面積內標法、外標法或歸一化法進行定量,并與計算機結合作為現代分析方法對。
定性分析
色譜方法的定性分析的目的是確定每個色譜峰代表哪些組分,從而確定由這些組分組成的混合物樣品的組成常用的定性方法有色譜鑒別法和非色譜鑒別法。
1.色譜鑒定法定性
色譜鑒別法是氣相色譜和高效液相色譜中最常用的定性方法之一,可與定量測定操作同時進行。
(1)利用保留值定性
在一定的色譜條件下(包括柱長、柱徑、固定相、柱溫、流動相、流速等),每種物質都有自己的保留值(包括保留時間、保留體積、保留時間的調整、保留時間的調整等)。體積等),一般不受其他成分影響,可作為定性成分使用。根據。這種方法也被稱為純物質控制。
在相同的色譜條件下,先測定未知物質中各峰的保留時間或保留距離,然后將待測純物質注入色譜儀。通過比較兩種物質的保留值,如果兩種物質的保留值相同,則可以確定未知物質與已知純物質為同一物質。
(2)利用加入純物質增加峰高法定性
在穩定的色譜條件下,為了區分兩個非常接近組分的保留值(保留時間或保留距離),可以直接向樣品中加入純物質,然后注入色譜,如果增加某一組分峰的峰高,則表明該峰是要添加的純物質。這種方法又稱純物質加性合法。
色譜鑒別方法的特點是需要控制純物質,在沒有純物質的情況下,色譜鑒別方法可以進行非色譜鑒別。
2.非色譜鑒定法定性
(1)利用文獻或相關工具書
任何實驗室都不可能通過比較所有物質的保留值來配備純產品。沒有純物質,就不可能定性。因此,國內外其他實驗室的分析化學或色譜分析期刊上可以使用色譜儀發表的具有相對保留值和保留指數(ix)數據的論文。(文學)。早期文獻數據已納入分析化學手冊中。只要這些數據能在相同的色譜條件下重現,就可以用于定性分析。
其中一個組分i 的相對保留值是組分i 與另一個標簽(堿基)準物質s 的調整保留值之比,即t - ri 是組分i 的調整保留時間,t - s 是標記(堿基)準物質s 的調整保留時間,v - ri 是組分i 的調整保留體積,ml ; V-R 是標記(堿基)準物質s 的調整保留體積。
組分的相對保留僅與固定液,柱溫有關,與其他操作條件無關,可參見液相色譜部分或分析化學手冊中的相關文獻..
在分析化學手冊或文獻中比較了相同操作條件下的相對保留值。如果被測組分的相對保留值與分析化學手冊或文獻中的相對保留值相同,則該組分與分析化學手冊或文獻中的相對保留值相同。
(2)利用保留指數定性
1958年Kovats制作的保留指數I的使用仍被國際公認為最廣泛使用的定性參數。規定X物質的保留指數I可由色譜峰和鄰區正構烷烴標準物質的相關值(使用均勻標度,不帶對數)計算,即正構烷烴的保留指數I等于l到100倍于正構烷烴分子中碳原子z的數量。
保留指數I僅與固定液體的性質有關與其他操作條件無關物質x的保留指數ix也可以通過調整保留距離和體積來計算。
在定性分析中,選取的兩種正構烷烴與待測物質均勻混合,并根據“分析化學手冊”或文獻中規定的固定相和柱溫進行色譜分析。色譜峰后所測物質的保留指數IX與“分析化學手冊”或文獻中已知物質的保留指數(如果與已知物質的保留指數相同)進行比較。可以確定這兩者是同一物質。
保留指數的定性分析常用于高效液相色譜的定性分析。
(3)利用化學反應定性
化學反應和色譜分析的結合有利于對含有復雜官能團的組分進行定性分析它可以定性地與柱前、柱后和柱后預處理相結合。
①利用柱前預化學處理法定性
一些含有特殊官能團的化合物可以與特殊的化學試劑反應生成相應的衍生物。經柱前化學預處理后,該化合物的色譜峰消失,或移動,或提前。通過比較治療前后的色譜圖,可以確定該成分屬于哪種化合物。
②利用柱中化學處理法定性
將化學試劑涂在載體上,填充在短柱中,并在分析柱前串聯,也可在柱前化學處理中起到定性作用。
③利用柱后化學處理法定性
色譜分離后,將流動柱的組分直接引入化學試劑中,觀察其顏色變化或沉淀、氣體生成等情況,進行定性分析。
④與其他儀器結合定性
采用質譜儀和紅外吸收光譜儀對色譜柱中的組分(組分)進行了定性分析。該質譜儀能準確地測量未知物質的相對分子質量靈敏度高紅外光譜具有很強的紅外吸收潛力,對純物質具有精細的結構特征。這種組合有利于復雜物質的表征。但由于紅外光譜儀的靈敏度不高,需要對lmg樣品進行成分分析。
高效液相色譜(HPLC)在化學反應和紅外光譜分析中具有一定的優勢。由于高效液相色譜(hplc)比氣相色譜(gc)具有更多的樣品,因此在柱后采集樣品中的純組分比氣相色譜(gc)容易得多。在足夠大的分離的情況下,當組分被確定為峰值時,測試管從檢測器的樣品池中填充組分溶液,并且當測試管連接到色譜峰的底部時,測試管被去除。該組分的純度可通過反復接收該峰的流出液并除去流動相溶劑來獲得。如果得到的結果大于LMG,則可以使用紅外吸收光譜儀進行定性分析。
在質譜定性分析中,高效液相色譜法并不像氣相色譜法那樣流行和成熟。
色譜分析也可以與熒光光譜、極譜法、核磁共振譜和其它定性分析方法相結合。
⑤利用經驗規律定性
在沒有被測組分的純物質和文獻資料的情況下,可以用一些組分的經驗規律來表征物質例如在一定溫度下有機同系物的保留值的對數與其分子中的碳原子數呈線性關系,即碳數定律。此外,在一定溫度下,同系物碳鏈異構體保留值的對數與其沸點呈線性關系,即沸點定律。在同源碳鏈異構體中,低沸點組分首先出現但這些法律也有一定的局限性。