高效液相HPLC溶劑的選擇及使用（三）

3、溶劑與檢測器的匹配

在使用紫外可見光檢測器時，需選用無紫外吸收特性的溶劑作流動相。樣品測定波長應當在溶劑紫外吸收波長上限以上，噪聲降至10-4 ～ 10-5AU，才能保證檢測的靈敏度，才能用于梯度洗脫。流動相溶劑在整個梯度范圍內互溶性要好，盡量減少溶劑折光指數對溶劑組成梯度的影響。溶劑折光指數的改變會導致紫外吸收度的變化，使紫外檢測器產生噪音和漂移。因此，當使用兩種或兩種以上溶劑做梯度時，其折光指數應該盡量接近，盡量減少溶劑紫外吸收度改變的影響。

在使用示差折光檢測器時，應使流動相的折光指數與被測樣品的折光指數有盡可能大的差別，因為二者的折射率差別越大，檢測器的響應信號越大，檢測靈敏度越高。示差折光檢測器一般不用于梯度洗脫，這是因為隨溶劑組成的改變，流動相的折光指數也在改變，無法使基線穩定。

使用熒光檢測器時，不能使用可熄滅、抑制或吸收熒光的溶劑作流動相。溶劑的極性和溶液的溫度對熒光強度有明顯的影響。增大溶劑的極性，導致熒光增強。通常熒光物質溶液的熒光效率和熒光強隨著溫度的升高而降低。此外，當樣品濃度較高時，易引起熒光猝滅效應和內濾效應，溶液濃度越大，該效應越顯著，溶液中的其它成分，特別是順磁性物質的存在，將使猝滅效應加劇。因此，在進行熒光檢測時，試樣要配成低于10-6 g／mL濃度的溶液，要使用不含熒光物質的溶劑。

電化學檢測器所用的流動相必須具有導電性。安培檢測器采用的流動相中必須有常用濃度范圍為0.01 mol／L-0.1 mol／L電解質(如含鹽的緩沖液)存在。流動相要有足夠高的介電常數，使電解質充分解離。流動相在電極表面呈電化學惰性，工作電壓下背景電流小。

為什么乙醇、丙醇、丙酮不被用做流動相？

研究表明，當流動相的A>0.7的時候，基線噪聲會顯著增加，一般選擇的吸收值<0.5。當A>1.0時，基本就不能用使了。對于示差折光檢測器，主要考慮樣品和流動相的折光率，這里不 再贅述。

選用的溶劑粘度要低、沸點適中使用低粘度溶劑，可減小容質的傳質阻力，降低柱壓，利于提高柱效。從分離制備和色質連用考慮，沸點要適中，低沸點的溶劑有它的優點;但僅僅用 于分析，沸點太低，反而由于溶劑的揮發，造成保留時間的變化。

盡量不用高毒性的溶劑不只是環境，單從我們自身的安全考慮，當然用低毒溶劑最好。

溶劑對樣品有足夠的溶解力樣品如果不能溶解在選用的溶劑里，還怎么分析?

但如果樣品在流動相里溶劑仍然不大，可以用樣品的最佳溶劑先溶解，再用流動相稀釋，就 可以了。

知道了上面選擇溶劑的一般原則，就不難理解為什么不同乙醇、丙醇做流動相的原因了，因 為它們的粘度大。 還有丙酮，雖然粘度和毒性較低、溶解度大、極性適中，但用于它的截至吸收波長為330nm， 所以不常用，如果樣品的吸收大于330nm，其實用丙酮是一個不錯的選擇。