? 百恩維公司生產研發的高效轉染試劑盒（HET）可有效地轉染各種哺乳動物細胞，通常 293 細胞轉染率很容易達到 40-50%，優化條件后更能高達 90%以上。并且對細胞基本沒有毒 性。不僅可以瞬時表達，也可以篩選穩定細胞株。 ? 質粒 DNA, DNA, siRNA 等均可使用。 ? 可用于轉染的細胞包括各種細胞株（如 HEK293，NIH3T3，COS7 等）和原代細胞（如成 纖維細胞，成肌細胞，間充質干細胞，角質細胞，內皮細胞，上皮細胞等）。 ? 轉染前以細胞融合度不超過 80%為宜。接種密度因所采用的細胞系和細胞的倍增時間而 有所不同。一般而言，細胞的接種密度為 3～5 × 106 cells/100-mm 培養皿，1～2×106 cells/60-mm 培養皿或 6 孔板中為 6～8 ×105 cells/孔。 ? 本試劑盒可轉染六孔板細胞 1000 次，每孔成本 5 毛錢，性價比非常高。 ? 本試劑盒提供的試劑都經無菌處理，并通過嚴格質量檢驗，可以直接使用。 保存條件 本試劑盒可在室溫（15～25℃）保存三個月，4℃保存一年，-20℃保存一年以上。 包裝清單 產品名稱 包裝 Buffer A 50ml Buffer B 5ml 標準操作步驟 1. 使用前預熱試劑至常溫。 2. 轉染前一天，接種適量細胞懸液至 100-mm 培養皿、60-mm 培養皿或 6 孔板中，放置 到潮濕 37°C 5% CO2 培養箱培養過夜。 3. 次日，吸去細胞培養液，加入新鮮培養液（不含青霉素-鏈霉素）。 4. 取兩根無菌 1.5ml eppendorf 管，分別記為 A、B。按下表，根據培養皿不同而加入不 同體積的試劑： 100-mm 培養皿 （含 5ml 培養基） 60-mm 培養皿 （含 2.5ml 培養基） 6 孔板 （含 1ml 培養基） A 管：500μl Buffer A A 管：250μl Buffer A A 管：50μl Buffer A B 管：50μl Buffer B 10~100μg DNA 無菌水補足體系至 500μl B 管：25μl Buffer B 5～50μg DNA 無菌水補足體系至 250μl B 管：5μl Buffer B 1～10μg DNA 無菌水補足體系至 50μl 5. 用移液管混勻 B 管中溶液并將 B 管中溶液輕輕逐滴加入到 A 管中。用氣泡法混勻轉染 混合物，這一步盡量在 2 分鐘內完成，室溫孵育 30 分鐘。 6. 將混合物逐滴加入到細胞中，輕輕搖晃培養皿使混合物均勻分布在細胞表面。 7. 放置到潮濕 37°C、5%CO2培養箱中培養過夜。 8. 次日早上用新鮮培養基更換細胞培養液，于 37℃ 5%CO2培養箱中繼續培養 24-48h。 9. 檢驗轉染效率（如熒光觀察，蛋白質印跡等）。 注意事項： 高純度的質粒是獲得高轉染效率的必要條件，要確保 A260/A280 大于 1.8，并且電泳檢 測抽提到的質粒 90%以上都是超螺旋。 轉染時，B 管中溶液輕輕逐滴加入到 A 管中，請勿混亂順序。 溶液的 pH 值關系到轉染效率，盡量避免把轉染試劑盒的溶液長時間暴露在空氣中， 以免被空氣中的二氧化碳酸化。 轉染時由于質粒不同、細胞不同，最佳的質粒用量需自行摸索。 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。